人卵巢癌干祖/细胞的分离、鉴定及抗CD44单克隆抗体对其生物学行为影响的研究

摘要

近年来，在肿瘤的研究中提出了一种新的观点-癌干细胞学说。该学说认为癌细胞为功能异质的细胞群体，其增殖和分化能力有等级之分，只有少数所谓的癌干细胞具有自我更新和多向分化的能力，是肿瘤发生和发展的根源；癌干细胞多处于细胞周期的静息期；手术、化疗和放疗等常规治疗手段可以使肿瘤组织缩小但无法彻底根治肿瘤的原因在于忽略了癌干细胞的存在。正是癌干细胞学说的提出使人们对于癌症——一种机制不清且以传统的手段还很难控制的疾病的发生、发展、转移、治疗及其复发等方面的认识具有了新的理念。肿瘤的转移、复发正是由于传统的治疗方案对这些所谓的癌干细胞疗效不佳，基于此，目前我们急需找到一种新的抗肿瘤策略，它可以通过改变癌干/祖细胞的某些生物学特性来遏制肿瘤的生长。抗CD44单克隆抗体在人白血病干细胞靶向治疗的研究中已得到广泛应用，而抗CD44单克隆抗体对卵巢癌干细胞是否有同样的作用还不为人所知，需要进一步的研究。在本实验研究中首先通过球形体形成法从人卵巢癌细胞系SK-OV-3中初步分离纯化了卵巢癌干/祖样细胞，并分别从自我更新，多向分化，干细胞表面标志及动物体内致瘤性等几个方面加以鉴定，为卵巢癌干/祖细胞的靶向治疗研究提供实验模型；然后我们使用抗CD44单克隆抗体(A3D8)处理来自人卵巢癌细胞系SK-OV-3的癌干/祖细胞，以观察A3D8对卵巢癌干/祖细胞的生物学行为是否有影响。
　　 结果显示：人卵巢癌细胞系SK-OV-3中存在一群具有干细胞特征的细胞亚群，并且能稳定的扩增、传代，可以作为卵巢癌干/祖细胞进一步研究的实验工具。本实验还发现抗CD44单克隆抗体(A3D8)对来自SK-OV-3细胞系的癌干/祖细胞的生物学行为具有广泛的影响：①A3D8以剂量依赖方式抑制卵巢癌干祖细胞的增殖。②A3D8可以降低卵巢癌干/祖细胞中G0/G1期细胞所占比例，同时增加G2/M期细胞所占比例。③A3D8可以增强顺铂对卵巢癌干/祖细胞凋亡的诱导作用。④A3D8可以抑制卵巢癌干/祖细胞在体外的克隆形成能力。⑤A3D8可以诱导卵巢癌干/祖细胞表达卵巢上皮标志物CK7和CA125。⑥A3D8可以抑制卵巢癌干/祖细胞体外侵袭能力。通过以上结果我们认为：利用球形体形成法从人卵巢癌细胞系SK-OV-3中分离纯化出的卵巢癌干/祖细胞在体外具有自我更新、无限增殖、多向分化潜能以及在动物体内具有高致瘤性。以上实验数据初步表明这一细胞亚群具有癌干/祖细胞的特性，可以用于卵巢癌干/祖细胞的研究；抗CD44单克隆抗体(A3D8)有可能对卵巢癌干/祖细胞的生物学行为产生影响，将会为卵巢癌的靶向治疗研究提供有价值的实验依据。