PKC-α-Nrf2/HO-1信号通路在电针干预兔内毒素休克急性肺损伤中的作用

摘要

背景：内毒素休克可致急性肺损伤，严重者可导致急性呼吸窘迫综合症(ARDS)甚至多器官功能衰竭，病死率较高。研究证实，电针刺激足三里和肺俞穴，可减轻内毒素休克所致急性肺损伤。蛋白激酶 C(PKC)属于丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶家族，广泛存在于机体的组织细胞内，它包括12种同工酶，PKC-α是其中之一且经常用来作为研究对象。本课题组前期研究发现，Nrf2-ARE通路激活后可使内毒素休克致急性肺损伤减轻。作为 Nrf2-ARE通路的下游基因，血红素氧合酶（HO-1）在应激状态下，与其催化产物在机体发挥重要的内源性保护作用。通过对相关文献报道的查阅，我们尚未发现在对内毒素致兔急性肺损伤模型得研究中，有人将电针刺干预与PKC-α- Nrf2/HO-1信号通路的关系进行过阐述。
　　目的：本研究拟通过观察兔内毒素休克致急性肺损伤模型中，不同组别肺组织病理学改变及分子层面各项研究指标表达水平的变化,来明确 PKC-α-Nrf2/HO-1通路在电针刺激相关穴位（足三里、内关穴和肺俞穴）,干预兔内毒素休克致急性肺损伤中的作用。
　　方法：健康雄性新西兰大白兔80只，2月龄，体重1.5~2.0Kg，采取随机数字表法分为8组(n=10)：对照组(C组)、内毒素休克所致急性肺损伤组( L组)、电针刺激穴位+L组(EL组)、电针刺激非穴位+L组(SEL组)、PKC抑制剂白屈菜红碱组（Che组）、二甲基亚砜组（E组）、PKC抑制剂+L组（LC组）、电针刺+PKC抑制剂+L组（ELC组）。EL组、ELC组电针刺激双侧足三里、内关穴和肺俞穴，疏密波，频率2Hz/15Hz，刺激电流1~2mA，波宽0.2~0.6ms，刺激强度以兔肢体出现与电针频率一致的轻微颤动为宜，1次/d，30min/次，连续5d；SEL组电针刺激足三里、内关穴和肺俞穴旁开0.5cm非经非穴处，针刺参数同 EL组。实验当日，电针刺贯穿整个实验过程。实验开始后，按实验组别分别进行处理。Che组及 LC组经耳缘静脉注射白屈菜红碱5mg/kg（溶于0.5ml0.1％二甲基亚砜），E组静脉注射0.1%二甲基亚砜0.5ml，其余组给予等容量的生理盐水；30分钟后L组、EL组、SEL组、LC组及ELC组经兔耳缘静脉给予 LPS5mg/kg(溶于2ml生理盐水)，其余组给予等容量的生理盐水。以注射 LPS2h内平均动脉压下降≥基础值的25%为模型制备成功。兔耳缘静脉静脉注射 LPS或生理盐水后6h时，取颈总动脉血行血气分析后处死大白兔，取肺组织，进行病理学观察及肺损伤评分，计算肺组织湿/干重比(W/D)，测定肺组织匀浆中 MDA含量及 SOD活性，检测 Nrf2mRNA、HO-1mRNA、HO-1蛋白、Nrf2核蛋白和总蛋白以及PKC-α蛋白表达水平。
　　结果：与C组相比，L组、EL组、SEL组、LC组及ELC组SOD活性活性降低，肺组织病理学评分、W/D、MDA含量升高，Nrf2 mRNA、HO-1mRNA、HO-1蛋白、PKC-α蛋白及Nrf2核蛋白和总蛋白表达上调(P<0.05)， Che组、E组上述各指标差异无统计学意义（P>0.05）；与 L组相比，EL组肺组织病理学评分、W/D、MDA含量降低，SOD活性升高，Nrf2mRNA、HO-1mRNA、HO-1蛋白、PKC-α、Nrf2核蛋白及总蛋白表达上调(P<0.05)，LC组、ELC组肺组织病理学评分、W/D、MDA含量升高， SOD活性下降， Nrf2mRNA、HO-1mRNA、HO-1蛋白、PKC-α蛋白及 Nrf2核蛋白和总蛋白表达下调（P<0.05）， SEL组上述指标差异无统计学意义(P>0.05)；与EL组相比，SEL组、ELC组肺组织病理学评分、W/D、MDA含量升高，SOD活性降低，Nrf2mRNA、HO-1mRNA、HO-1蛋白、PKC-α蛋白及 Nrf2核蛋白和总蛋白表达下调(P<0.05)；与 LC组相比，ELC组肺组织病理学评分、W/D、MDA含量降低，SOD活性升高，Nrf2mRNA、HO-1mRNA、HO-1蛋白、PKC-α蛋白及 Nrf2核蛋白和总蛋白表达上调（P<0.05）。
　　结论：电针刺干预兔内毒素休克肺损伤中，可通过 PKC-α-Nrf2/HO-1通路的激活改善肺损伤程度，进而发挥肺保护作用。

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符号说明

前言

研究现状、成果

研究目的、方法

1对象与方法

1.1 实验材料

1.2 实验方法

2结果

2.1 描述性统计

2.2 各组肺组织病理学观察及损伤评分

2.3 肺组织W/D比率测定

2.4 各组肺组织MDA含量及SOD活性测定

2.5 肺组织HO-1蛋白、Nrf2核蛋白、Nrf2总蛋白及PKC-α蛋白表达测定

2.6 各组肺组织HO-1mRNA和Nrf2 mRNA表达测定

3讨论

3.1 模型的建立及评价

3.2兔针刺穴位的选择

3.3电针刺参数的选择

3.4 PKC-α-Nrf2/HO-1信号通路

3.5 PKC-α-Nrf2/HO-1信号通路与肺损伤

3.6 PKC-α- Nrf2/HO-1 信号通路在电针刺干预内毒素休克致急性肺损伤中的作用

结论

参考文献

发表论文和参加科研情况说明

综述:中、西医对急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征的认识及展望

致谢

个人简历