PPARγ激动剂和ERK1/2抑制剂组合药物治疗ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化的研究

摘要

动脉粥样硬化发病关键因素为高脂血症、血管内皮损伤和泡沫细胞的形成。其中高脂血症是动脉粥样硬化的主要诱导因素。低密度脂蛋白受体(LDLR)在各个组织中都有所表达，肝脏中表达最多。LDLR能够清除血液中低密度脂蛋白胆固醇酯(LDL-C)，降低胆固醇在血液中的浓度，缓解高脂血症。LDLR蛋白水平受胆固醇调节元件结合蛋白(SREBP-2)的转录调控，同时也受到转录后水平的调节，例如在质膜上发挥作用的时间、降解速度等。PCSK9是在血液循环系统中是LDLR的重要调节蛋白，PCSK9能够结合LDLR受体结合区域，促进LDLR内陷进入细胞溶酶体被不可逆降解，减少LDLR在细胞膜上的蛋白水平。过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)在调节胆固醇代谢过程中发挥关键作用，它能够激活PKB/IRS信号通路增加胰岛素敏感度，也能够通过抑制TNF-α、IL-6、MCP-1、CCR2、OPN、VCAM-1等炎症因子的产生来降低机体炎症反应。胆固醇代谢方面，PPARγ可以对ABCA1、CD36等胆固醇膜转运蛋白表达进行直接调节，也可以通过SREBP-2发挥间接作用。体外细胞实验通过HepG2细胞系验证了PPARγ能够促进SREBP-2的剪切增加其成熟体的蛋白水平。脂肪细胞分化与EKR1/2通路的级联磷酸化有关，ERK1敲除小鼠表现出降低身体肥胖和胰岛素抵抗。因此ERK1/2通路磷酸化的抑制也是治疗动脉粥样硬化的一种手段。在体内环境中，PPARγ激动剂pioglitazone以及胞外信号调节激酶1/2抑制剂U0126会促进肝脏组织SREBP-2前体和成熟体的表达。实验室前期工作发现PCSK9启动子上游有SREBP结合位点SRE，本次体内实验证明了pioglitazone以及U0126会诱导PCSK9和LDLR蛋白的同时上调，并且动脉粥样硬化斑块面积和厚度有明显减小。血清中，自由胆固醇浓度因LDLR蛋白水平上升而有比较显著的下降。肝脏油红染色和肝脏FASN的蛋白检测都表明，pioglitazone药物喂食不影响肝脏脂肪酸的合成和甘油三酯的积累，血清甘油三酯喂药后没有显著变化，pioglitazone组合U0126喂药会防止小鼠肝脏极端脂质积累状况的发生。最后可以得出，PPARγ激动剂pioglitazone能够比较显著的治疗小鼠动脉粥样硬化病症的发生，这种治疗作用是通过对小鼠血清LDL的降解实现的，甘油三酯的代谢并未受到影响。因此，PPARγ信号通路作为治疗动脉粥样硬化的靶标通路是具有非常现实的意义的。

目录

声明

摘要

第一章 前言

第一节 心血管疾病与我们

第二节 动脉粥样硬化发病机理

第三节 动脉粥样硬化治疗的研究方向

第四节 PPARγ与动脉粥样硬化

第五节 ERK1／2与动脉粥样硬化

第六节 脂质代谢相关的下游蛋白

1．6．1 甘油三酯代谢相关蛋白

1．6．2 胆固醇代谢相关蛋白

1．6．3 血浆胆固醇调节蛋白

第二章 实验材料与方法

第一节 实验动物准备

第二节 实验使用材料和器材

2．2．1 实验材料

2．2．2 实验器材

第三节 实验方法和原理

2．3．1 小鼠饲养

2．3．2 小鼠解剖和组织分离

2．3．3 小鼠主动脉以及肝脏油红O染色

2．3．4 小鼠肝脏以及主动脉根部油红O染色

2．3．5 小鼠血清LDL-C、HDL-C、TG、TC含量检测

2．3．6 小鼠肝脏蛋白表达检测(western blot)

第三章 实验结果

第一节 小鼠高脂食物喂食以及药物喂食效果

第二节 吡格列酮组合U0对动脉粥样硬化有治疗作用

3．2．1 小鼠全主动脉油红染色，pioglitazone组合U0126能够明显下调全主动脉斑块面积

3．2．2 吡格列酮组合U0同样能够减少主动脉根部AS斑块的厚度

3．3．1 小鼠肝脏照相照片。喂食高脂食物促进小鼠肝脏脂肪积累，肝脏颜色倾向于黄白色，肝脏体积相较于普通喂食小鼠也有所增加，pioglitazone组以及组合喂药组小鼠肝脏颜色比对照组有所加深，但是并未降低小鼠肝脏重量

3．3．2 肝脏冰冻切片油红染色发现，三组肝脏油红染色差异不大

第四节 pioglitazone喂药以及组合喂药下降血清中LDL、HDL、TC含量均，而TG几乎不受影响

第五节 小鼠肝脏蛋白表达定量检测

3．5．1 小鼠肝脏LDLR水平受到pioglitazone以及组合喂药上调

3．5．2 小鼠肝脏PCSK9蛋白表达测定发现piog以及组合喂药会上调该蛋白的表达

3．5．3 SREBP-2在肝脏中不论是前体形式还是成熟形式都能被pioglitazone或者组合喂药一定程度的上调

第四章 实验结果讨论

第一节 PPARγ作为治疗动脉粥样硬化的新靶点

第二节 此次实验选题依据、结果讨论和最终结论

4．2．1 选题依据

4．2．2 结果讨论

4．2．3 实验结论

参考文献

致谢

个人简历