药对“柴胡-白芍”对LPS诱导的急性肝损伤大鼠的保护作用和机制研究

摘要

肝损伤是多种肝脏疾病伴随的存在的病理状态，它时常存在急性或者慢性肝病的发生中，涉及范围广泛。急性肝损伤一种临床上很常见的疾病，如果未得到及时的治疗和处理，会出现肝组织中肝细胞坏死凋亡，发展后期导致肝衰竭，甚至肝硬化或肝癌。LPS诱导的急性肝损伤是啮齿类动物造急性肝损伤的常见实验动物模型。药对“柴胡-白芍”是中兽医学上使用过对治疗肝病的经典药对。本研究建立大鼠LPS诱导下急性肝损伤模型，研究药对“柴胡-白芍”对急性肝损伤的影响，主要研究方法和结果如下:
　　1.药对“柴胡-白芍”对LPS诱导的急性肝损伤部分药理作用研究:将药对“柴胡-白芍”低、中、高剂量给大鼠灌胃，腹腔注射LPS建立急性肝损伤模型并评价。发现LPS刺激下，大鼠各个脏器指数均异常，肝脏病理切片观察病变严重，大鼠血液学指标中血常规异常，肝功能指标明显升高。药对“柴胡-白芍”预处理对脏器指数异常、组织病变和血液学指标都有所缓解。以上结果说明:药对“柴胡-白芍”能有效缓解LPS诱导急性肝损伤的肝脏受损情况，对肝脏有一定保护作用。
　　2.药对“柴胡-白芍”对LPS诱导的急性肝损伤的氧化应激和抗炎作用研究:生化检测氧化应激因子，ELISA检测炎性因子的表达。发现药对“柴胡-白芍”预处理对LPS刺激下的肝脏GSH-PX、SOD、IL-10上调作用，对MDA、NO、iNOS、TNF-α、IL-1β和IL-6有下调作用。说明:药对“柴胡-白芍”能有效缓解氧化和炎性刺激，起到一定抗氧化抗炎作用。
　　3.本研究采用RT-PCR、Western Blot和“Cocktail”探针药物法，从基因水平、蛋白表达和药酶活力三个方面，发现LPS诱导的急性肝损伤对肝药酶CYP1A2、CYP2C11、CYP2D6、CYP3A1和核受体PXR、CAR和AhR均有抑制作用对肝药酶CYP2E1有促进作用，药对“柴胡-白芍”预处理能降低肝药酶和核受体的异常升降，对药对“柴胡-白芍”对急性损伤肝脏机制有个初步了解。
　　综上所述，药对“柴胡-白芍”对LPS诱导的急性肝损伤有较好的保肝作用，起到缓解脏器指数异常和减少肝组织病变以及维持血液系统平衡的作用。并起到抗氧化应激损伤和抗炎性损伤作用。在LPS导致肝药酶CYP1A2、CYP2C11、CYP2D6、CYP3A1和核受体PXR、CAR和AhR均表达和活性抑制，对肝药酶CYP2E1表达和活性促进情况下，药对“柴胡-白芍”都干预肝药酶和核受体的表达与活性，起到恢复作用，对肝药酶的稳定起到一定作用。

目录

声明

摘要

常用符号及缩略语说明

第一章文献综述

1柴胡、白芍单昧中药及其药对的研究概况

1．1柴胡

1．2白芍

1．3药对“柴胡-白芍”

2急性肝损伤研究进展

2．1急性肝损伤的发生机制

2．2中兽医上对肝损伤的认识和治疗概况

3 CYP450酶的研究概况

3．1 CYP450酶简介

3．2 CYP450酶常见5个亚型的研究概况

3．3肝中核受体PXR、CAR和AhR研究概况

4实验目的与意义

第二章药对“柴胡-白芍”对LPS诱导急性肝损伤部分药理作用研究

1实验动物与材料

1．1实验动物

1．2实验试剂

1．3实验仪器

2实验方法

2．1药液的制备

2．1分组与给药

2．2急性肝损伤模型建立与样品的采集

2．4药对“柴胡-白芍”对LPS诱导急性肝损伤对大鼠血液学的影响

2．5图像采集

2．6数据分析

3实验结果

3．1大鼠脏器指数结果

3．2大鼠肝脏病理组织切片观察

3．3大鼠血液学影响

4分析与讨论

4．1 LPS诱导急性肝损伤对大鼠脏器指数的影响

4．2 LPS诱导急性肝损伤对大鼠肝脏组织病理学的影响

4．3 LPS诱导急性肝损伤对大鼠血液学的影响

5小结

第三章药对“柴胡-白芍”对LPS诱导的急性肝损伤氧化应激和抗炎活性研究

2．2蛋白浓度的测定

2．3氧化应激因子的检测

2．4炎症反应因子检测

2．5数据分析

3实验结果

3．2药对“柴胡-白芍”对LPS诱导急性肝损伤对大鼠炎性因子的影响结果

4结果与分析

4．1 LPS诱导肝损伤对大鼠氧化应激因子的影响

4．2 LPS诱导肝损伤对大鼠炎性因子的影响

5小结

第四章药对“柴胡-白芍”对LPS诱导的急性肝损伤中CYP450s的影响

1．1实验试剂

1．2实验仪器

2实验方法

2．1样品的处理

2．2 RT-PCR技术检测肝脏中CYP450s mRNA表达

2．3 Western blot技术检测肝脏中CYP450s蛋白表达

2．4“鸡尾酒”药物探针法检测肝脏中CYP450s体外活力

2．5结果分析

3实验结果

3．1RT-PCR技术检测急性肝损伤中CYP450s和核受体mRNA表达

3．2 Wbstern blot技术检测急性肝损伤中CYP450s与核受体蛋白表达

3．3“鸡尾酒”药物探针法检测大鼠急性肝损伤中CYP450s体外活力

4分析与讨论

4．2 Western blot技术检测急性肝损伤中CYP450s与核受体蛋白表达的影响

4．3“鸡尾酒”药物探针法检测急性肝损伤中CYP450s体外活力的影响

5小结

第五章结论与创新

参考文献

致谢

作者简历