深圳市军团菌污染现况及分子流行病学研究

摘要

本文拟对深圳市空调冷却塔微生物污染状况，尤其是军团菌污染状况作较为全面的调查，建立流行病学资料。 目的：1.对深圳市宾馆、医院、影院、写字楼等公共场所的空调冷却塔水进行军团菌的分离培养，了解军团菌的污染状况。检测细菌总数、大肠菌群、粪大肠菌群，初步了解空调冷却塔微生物污染状况以及军团菌与它们之间是否存在一定联系。2.对所采集的冷却塔水进行PCR检测，并与常规分离培养方法进行比较。3.用AFLP技术对常规分离培养出的菌株进行分子生物学分型，分析分离菌株的多态性，确定菌株的遗传基础之间相互的联系和变异，了解深圳市军团菌分布流行病学特征。 方法：1.采用平皿计数法对中央空调冷却塔水进行军团菌的分离培养，用血清学方法对分离菌株进行初步鉴定。2.检测冷却塔水中pH值以及细菌总数、大肠菌群以及粪大肠菌群，了解其与军团菌检出之间是否存在一定联系。3.分别用两种引物，一种是军团菌属特异性引物5srRNA，另一种是嗜肺军团菌巨噬细胞感染力增强因子基因(mip)对冷却塔水中军团菌进行PCR方法确证。确定两种引物检出军团菌的灵敏度。将PCR方法与常规分离培养进行对校，探讨两种方法在检测军团菌时的利弊。4.采用AFLP基因分型技术(按照TheEuropeanWorkingGroupforLegionellaInfections标准)[2]对所分离菌株进行分子分型。测定DNA在260nm、280nm处的吸光度值，计算DNA浓度。分析AFLP图谱，探讨在整个调查中的优势菌种。并用Bionumerics软件对图谱进行聚类分析，观察菌株之间的相似度。 结果：1.在所调查的55家宾馆、商场、医院等公共场所中，有31家存在军团菌污染，污染率为56.4％。在所采集的103份冷却塔水样中，有53份检出军团菌，阳性率为51.5％。2.用常规分离培养方法共分离到67株军团菌。用血清学方法检查，嗜肺军团菌53株，非嗜肺14株。3.PCR方法中两种引物检测军团菌的灵敏度分别为5srRNA为＞1.05×108cfu/mL，mip＞1.05×103cfu/mL。4.采用常规分离培养方法与PCR方法对冷却塔水进行检测，比较两者的阳性检出率。结果表明PCR方法有较高的检出率，103份冷却塔水，PCR方法检出率为94.2％；而常规培养方法的检出率为51.5％。5.采用AFLP基因分型技术对分离到菌株进行分子分型，lp1型共分离到8种不同的AFLP图谱，分别记为AFLP1-8，其中AFLP1型与AFLP5型为主要型别。lp2-14型共分离到7种AFLP图谱分别记为AFLPⅠ-AFLPⅦ，其中AFLPⅢ为主要型别。非嗜肺的型别分布不集中说明有不同种的非嗜肺型菌存在。5.应用Bionemerics软件对图谱进行分析，根据相似系数，将菌株分为10群，各菌间相似系数集中在70％-100％之间。 结论：本研究在深圳市各公共场所内，获得了冷却塔水中军团菌的流行病学资料，为比较研究提供了可靠数据，对军团菌进行了分子分型，可以了解菌株的遗传基础之间相互的联系和变异。为制订深圳市军团菌的监测防治措施和控制该病的爆发流行提供科学依据。

目录

课题设计路线图

前言

第一部分深圳市部分地区中央空调冷却塔军团菌污染现状调查

前言

1.材料与方法

2.结果

3.讨论

4.结论

第二部分检测军团菌常规培养方法与PCR方法比较

前言

1.材料与方法

2.结果

3.讨论

4.结论

第三部分采用AFLP技术对军团菌进行分子分型

前言

1.材料和方法

2.结果

3.讨论

结论

全文总结

参考文献

综述：水中军团菌检测研究进展

1.水中军团菌分离培养

2.军团菌的检测

参考文献

附录

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致谢

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