助孕Ⅰ号方孕前直肠给药对肾虚血瘀模型大鼠孕早期子宫内膜蜕膜化的影响

摘要

实验目的：
　　基于前期对助孕Ⅰ号方的临床疗效研究及实验研究，本实验研究助孕Ⅰ号方孕前直肠给药对改善肾虚血瘀模型大鼠妊娠的作用。观察助孕Ⅰ号方孕前直肠给药对肾虚血瘀模型大鼠妊娠第8天的黄体、生殖激素及其受体、蛋白分子、子宫内膜蜕膜化、妊娠率及胚泡着床点数的作用，探讨其可能的作用机理，为助孕Ⅰ号方孕前直肠给药对肾虚血瘀不孕症患者、围试管期患者的临床应用提供数据及理论支持。
　　实验方法：
　　通过阴道涂片筛选动情前期的成熟未交配雌性SD大鼠60只，随机分为空白组、模型组、助孕Ⅰ号方低剂量组、助孕Ⅰ号方高剂量组、五子组、丹参组。模型组及各治疗组用羟基脲+肾上腺素建立肾虚血瘀模型。在造模的同时，各治疗组予以干预，造模成功后，雌鼠于动情期合笼，发现阴栓或阴道涂片发现精子记为妊娠第1天，停止给药，分笼饲养，妊娠第8天股动脉取血，放射免疫法测定血清E2和P水平，之后颈椎脱臼处死大鼠，剖腹取出大鼠的子宫、卵巢，计数各组大鼠的妊娠只数和胚泡着床点数，切片染色后，在光镜下观察各组大鼠的黄体和子宫内膜蜕膜组织的形态学特征，免疫组化法检测子宫内膜蜕膜中ER、PR、LN、integrinβ3的表达。
　　实验结果：
　　1.助孕Ⅰ号方对肾虚血瘀模型大鼠妊娠率、胚泡着床点数的影响
　　与空白组比较，模型组大鼠的妊娠率、胚泡着床点数明显降低（P＜0.05）；与模型组比较，助孕Ⅰ号方（14.6g/kg）组大鼠的妊娠率、胚泡着床点数明显升高（P＜0.05）。
　　2.助孕Ⅰ号方对肾虚血瘀模型大鼠妊娠第8天黄体的影响
　　与空白组比较，模型组大鼠妊娠第8天黄体面积总和、r/R明显降低（P＜0.01-0.05）；与模型组比较，助孕Ⅰ号方（7.3g/kg）组的黄体面积总和、助孕Ⅰ号方（14.6g/kg）组的黄体面积和r/R明显升高（P＜0.01-0.05）；与五子组比较，助孕Ⅰ号方（14.6g/kg）组大鼠妊娠第8天黄体面积总和明显增加（P＜0.05）；与丹参组比较，助孕Ⅰ号方（7.3g/kg）组、助孕Ⅰ号方（14.6g/kg）组大鼠黄体面积总和明显增加（P＜0.05）。
　　3.助孕Ⅰ号方对肾虚血瘀模型大鼠妊娠第8天的子宫内膜蜕膜化的影响
　　正常组大鼠子宫内膜蜕膜组织间质细胞为多边形或类圆形样上皮细胞，细胞排列嵌紧，透明，核呈卵圆形，位于中央，染色淡蓝，核仁大而明显，无核凋亡，胞质丰富，染色淡，血管丰富。与空白组比较，模型组大鼠子宫蜕膜组织大部分蜕膜细胞形态不规则，胞浆明显水肿，细胞排列疏松，部分核消失，部分细胞核凋亡，血管数量明显减少（P＜0.01）；与模型组比较，助孕Ⅰ号方（7.3g/kg）组、助孕Ⅰ号方（14.6g/kg）组子宫蜕膜组织细胞为多边形或类圆形样上皮细胞，排列比较紧密，透明，核呈卵圆形，位于中央，染色淡蓝，核仁大而明显，无核凋亡，胞质丰富，染色淡，蜕膜组织血管增加（P＜0.05）；与模型组比较，五子组和丹参组大鼠子宫蜕膜组织细胞形态较规则，部分胞浆肿胀，排列较密，少数细胞核消失，胞质丰富，染色淡，血管较丰富，但是差异无统计学意义（P＞0.05）；助孕Ⅰ号方（14.6g/kg）组大鼠妊娠第8天子宫蜕膜组织血管增加优于五子组（P＜0.05）。
　　4.助孕Ⅰ号方对肾虚血瘀模型大鼠妊娠第8天的血清E2、P水平影响
　　与空白组比较，模型组大鼠血清E2、P水平明显降低（P＜0.05-0.01）；与模型组比较，助孕Ⅰ号方（14.6g/kg）组的大鼠血清E2、P水平和五子组大鼠血清的P水平明显升高（P＜0.05-0.01）。
　　5.助孕Ⅰ号方对肾虚血瘀模型大鼠妊娠第8天子宫蜕膜组织的ER、PR影响
　　与空白组比较，模型组大鼠子宫蜕膜组织ER、PR面积总和、积分光密度明显降低（P＜0.05-0.01），与模型组比较，助孕Ⅰ号方（7.3g/kg）组、助孕Ⅰ号方（14.6g/kg）组大鼠子宫蜕膜组织ER、PR的面积总和、积分光密度及丹参组的PR积分光密度明显升高（P＜0.05-0.01）；与五子组比较，助孕Ⅰ号方（7.3g/kg）组大鼠子宫蜕膜组织PR的积分光密度明显升高（P＜0.01）；与丹参组比较，助孕Ⅰ号方组大鼠子宫蜕膜组织ER、PR表达明显升高（P＜0.05-0.01）。
　　6.助孕Ⅰ号方对肾虚血瘀模型大鼠子宫蜕膜组织LN、integrinβ3影响
　　与空白组比较，模型组大鼠子宫蜕膜组织LN面积总和、积分光密度明显降低（P＜0.01）；与模型组比较，助孕Ⅰ号方（7.3g/kg）组大鼠子宫蜕膜组织LN的面积总和及助孕Ⅰ号方（14.6g/kg）组子宫蜕膜组织LN面积总和、积分光密度、integrinβ3面积总和明显增加（P＜0.05-0.01），五子组大鼠子宫蜕膜组织LN的面积总和明显增加，差异有统计学意义（P＜0.05）。
　　实验结论：
　　助孕Ⅰ号方（即补肾活血法中药）孕前直肠给药可改善肾虚血瘀模型大鼠子宫内膜蜕膜化，促进血管生成，增加胚泡着床点数、提高妊娠率，其可能机制如下：
　　1.助孕Ⅰ号方孕前直肠给药可促进肾虚血瘀模型大鼠黄体发育，增加黄体面积，疗效优于单用补肾法中药和活血法中药，改善黄体形状，从而促进分泌E2、P。
　　2.助孕Ⅰ号方孕前直肠给药可提高肾虚血瘀模型大鼠子宫蜕膜组织ER、PR、LN、integrinβ3的表达，ER、PR分别与E2、P结合并介导激素的生理效应，LN与integrinβ3等整合素家族和非整合素家族蛋白结合，将细胞粘着到基质，维持蜕膜组织的基底膜结构和功能，使胚泡滋养层不断向蜕膜中侵入,从而发挥正常的黏附功能，抑制胚泡过度浸润，使胚胎正常着床。