复方党参对模拟高原低氧大鼠脑细胞凋亡的影响及其机制的研究

摘要

该课题旨在已建立的模拟高原低氧致大鼠脑细胞凋亡模型的基础上,运用分子生物学技术并以cDNA微阵列技术为重点探讨中药复方党参对低氧性脑细胞凋亡的影响;研究复方党参发挥作用的细胞分子机制.主要研究内容有以下凡个方面：一、复方党参对模拟高原低氧大鼠脑细胞凋亡的影响：二、复方党参对高原低氧大鼠脑细胞凋亡相关基因表达谱影响的分析.该研究结果表明：1.模拟高原低氧能够导致大鼠脑细胞凋亡,凋亡的发生是一个动态发展的过程;2.低氧可以通过促凋亡基因p53、bax、bad、Hsp60等的上调触发凋亡的内源性途径,导致细胞凋亡;3.复方党参对低氧性脑细胞凋亡具有抑制作用,它的作用机制是影响细胞凋亡过程中多种成分的表达水平,主要是通过上调Bcl-2／Bax的比例以及Hsp70家族和Ras相关蛋白等的表达量,阻断细胞凋亡的内源性途径来实现的,具有多靶点、多层次的特性.

目录

缩写词表

前言

第一部分复方党参对模拟高原低氧大鼠脑细胞凋亡的影响

一、实验材料

1.实验动物

2.试剂

3.主要仪器

二、实验方法

1.复方党参液的配制和给药方法

2.动物模型的复制

3.组织细胞DNA提取

4.DNA琼脂糖凝胶电泳

5.脑组织石蜡切片HE染色

6.TUNEL

7.凋亡细胞计数与数据统计

三、实验结果

1.DNA琼脂糖凝胶电泳结果

2.组织切片HE染色结果

3.TUNEL结果

四、讨论

小 结

第二部分复方党参对高原低氧大鼠脑细胞凋亡基因表达谱影响的分析

一、实验材料

1.TrizolTMRNA提取试剂盒购自GibcoBRL公司

2.Atlas大鼠应激cDNA表达微阵列购自CLONTECH公司

3.放射性核素α-32PdATP购自北京辉生物公司

4.其他试剂

5.主要仪器

二、实验方法

1.总RNA的提取

2.eDNA探针的合成

3.杂交

4.基因表达谱数据的层级聚类分析

5.基因表达谱的自组图法分析

三、结果

1.Atlas cDNA微阵列磷屏成像

2.层级聚类分析

3.SOMs分析

四、讨论

小结

第三部分复方党参对凋亡相关蛋白分子Bcl-2、Bax表达的影响

一、实验材料

1.主要试剂

2.主要仪器

二、实验方法

1.大鼠脑组织冰冻切片

2.大鼠脑组织Bcl-2免疫组化

3.大鼠脑组织Bax免疫组化

4.细胞计数及数据统计

三、实验结果

1.Bcl-2免疫组化染色

2.Bax免疫组化染色

四、讨论

小结

结论

参考文献

致谢

文献综述