引入反向重复序列的腺病毒在肝癌介导选择性表达和溶瘤

摘要

腺病毒载体目前广泛应用于肿瘤基因治疗的基础研究和临床试验.近年来发展了一些新的载体构建策略使其效应获得肿瘤选择性,引入反向重复序列便是其中之一.E1基因删除的腺病毒载体能选择性地在肿瘤细胞中复制病毒DNA,在其目的基因两侧插入反向重复序列,当病毒DNA在肿瘤细胞中复制时介导同源重组,激活目的基因,实现基因转移的肿瘤选择性.我们研究了根据这个策略构建的载体Ad.IR-BG在原发性肝癌和结肠转移性肝癌实验性治疗中的效果.我们首先证实Ad.IR-BG在体外能选择性地在肝细胞癌(SMMC7721、MHCC97)和结肠癌(LoVo、HT29)细胞中表达报告基因(β-gal),而在正常肝细胞(WB)中的表达水平极低.不含反向重复序列的腺病毒载体Ad.BG表达β-gal没有选择性.通过尾静脉注射,Ad.IR-BG能选择性地在SMMC7721和LoVo裸鼠肝脏移植瘤内表达β-gal,肿瘤和瘤周肝表达比显著高于Ad.BG.使用DNA合成抑制剂羟基脲能抑制Ad.IR-BG感染的肿瘤细胞内病毒DNA的重组及β-gal的表达,而不影响Ad.BG的表达.这些结果说明Ad.IR-BG表达目的基因依赖病毒DNA在肿瘤细胞内复制和重组,非肿瘤细胞被其感染后无此过程,目的基因因此不表达,是选择性表达的机制.我们进一步发现,Ad.IR-BG还能选择性在肿瘤细胞中产生溶瘤效应(Oncolysis).Ad.IR-BG感染的SMMC7721和LoVo细胞发生明显的生长抑制和病理形态变化,利用

目录

中文详细摘要

引言

第一部分：载体的设计思路，构建、扩增及鉴定

第二部分：Ad.IR-BG在原发性肝癌和结肠转移性肝癌中的作用效应

第三部分：Ad.IR-BG在肝癌介导选择性基因表达及溶瘤的机制

讨论

材料和方法

参考文献

附录一：综述：条件复制型腺病毒治疗肿瘤的基础研究和临床试验进展

附录二：博士在读期间完成的相关论文

附录三：博士在读期间完成的论文列表

附录四：致谢

论文独创性声明及论文使用授权声明