摘要
缩略词表
Abstract
引言
第一章 文献综述
前言
第一节 麻疯树概述
1.1.1 麻疯树形态特征
1.1.2 麻疯树生境及地理分布
1.1.3 麻疯树化学成分
1.1.4 麻疯树主要用途
第二节 佛波醇酯
1.2.1 概述
1.2.2 毒性与药理活性
第三节 佛波醇酯生物合成途径
1.3.1 萜类合成途径——IPP生成
1.3.2 法呢基焦磷酸合酶
1.3.3 支路途径
第四节 麻疯树生物工程调控策略及前景
第二章 麻疯树佛波醇酯生物合成途径FPS基因的克隆与分析
引言
第一节 实验材料(为避免重复,还包括本文其他章节涉及的实验材料)
2.1.1 植物材料
2.1.2 菌株和载体
2.1.3 仪器和设备
2.1.4 试剂盒及购买的试剂
2.1.5. 自配的主要标准试剂
2.1.6. 自配的其它试剂
第二节 实验方法与步骤
2.2.1 麻疯树材料的准备
2.2.2 麻疯树叶片总RNA的抽提与质量检测
2.2.3 麻疯树叶片基因组DNA的提取
2.2.4 从麻疯树总RNA合成第一链3’cDNA
2.2.5 JcFPS基因核心片段的获得
2.2.6 麻疯树RACE-Ready 5’-cDNA的合成
2.2.7 JcFPS的5’RACE
2.2.8 JcFPS全长cDNA的克隆
2.2.9 本章涉及的DNA片段的回收、连接、克隆和测序
2.2.10 生物信息学分析
2.2.11 JcFPS的原核表达
2.2.12 JcFPS原核功能验证
第三节 结果与讨论
2.3.1 JcFPS cDNA的全长克隆和性质分析
2.3.2 推导的JcFPS蛋白质序列的性质分析
2.3.3 JcFPS蛋白的二级结构
2.3.4 JcFPS蛋白的三级结构预测
2.3.5 JcFPS蛋白的保守区预测
2.3.6 JcFPS蛋白的跨膜分析
2.3.7 JcFPS蛋白的原核表达
2.3.8 JcFPS的原核功能验证
第四节 讨论与小结
第三章 麻疯树类胡萝卜素生物合成途径PSY基因的克隆与分析
引言
第一节 实验材料
第二节 实验方法与步骤
3.2.1 麻疯树材料的准备
3.2.2 麻疯树叶片总RNA的抽提、检测与浓度测定
3.2.3 从麻疯树总RNA合成第一链3’-cDNA
3.2.4 JcPSY基因核心片段的获得
3.2.5 麻疯树RACE-Ready 5’-cDNA的合成
3.2.6 JcPSY的5’RACE
3.2.7 JcPSY全长cDNA的克隆
3.2.8 JcPSY基因组全长的克隆
3.2.9 本章涉及的DNA片段的回收、连接、克隆和测序
3.2.10 生物信息学分析
3.2.11 JcPSY的原核表达
第三节 结果与讨论
3.3.1 JcPSY cDNA的全长克隆和性质分析
3.3.2 推导的JcPSY蛋白质序列的性质分析
3.3.3 JcPSY基因组序列
3.3.4 JcPSY蛋白的叶绿体前导肽预测
3.3.6 JcSQS蛋白的二级结构
3.3.7 JcPSY蛋白的三级结构预测
3.3.8 JcPSY蛋白的保守区预测
3.3.9 JcPSY蛋白的跨膜分析
3.3.10 JcPSY蛋白的原核表达
第四节 讨论与小结
第四章 麻疯树甾醇生物合成途径SQS基因的克隆与分析
引言
第一节 实验材料
第二节 实验方法与步骤
4.2.1 麻疯树材料的准备
4.2.2 麻疯树叶片总RNA的抽提、检测与浓度测定
4.2.3 从麻疯树总RNA合成第一链3’-cDNA
4.2.4 JcSQS基因核心片段的获得
4.2.5 麻疯树RACE-Ready 5’-cDNA的合成
4.2.6 JcSQS的5’RACE
4.2.7 JcSQS全长cDNA的克隆
第三节 结果与讨论
4.3.1 JcSQS cDNA的全长克隆和性质分析
4.3.2 推导的JcSQS蛋白质序列的性质分析
4.3.3 JcSQS蛋白的分子进化分析
4.3.4 JcSQS蛋白的二级结构
4.3.5 JcSQS蛋白的三级结构预测
4.3.6 JcSQS蛋白的保守区预测
4.3.7 JcSQS蛋白的跨膜分析
第四节 讨论与小结
第五章 麻疯树FPS、PSY、SQS基因表达与佛波醇酯含量分析
第一节 实验材料
第二节 实验方法与步骤
5.2.1 麻疯树组织表达分析取材
5.2.2 麻疯树叶片总RNA的抽提、检测与浓度测定
5.2.3 麻疯树JcFPS、JcPSY、JcSQS基因表达分析
5.2.4 麻疯树叶片脱落酸处理
5.2.5 麻疯树材料佛波醇酯的提取
5.2.6 佛波醇酯HPLC测定条件
5.2.7 标准曲线绘制
5.2.8 样品测定
第三节 结果与讨论
5.3.1 各基因表达情况
5.3.2 佛波醇酯标准曲线
5.3.3 佛波醇酯在植物中的分布
5.3.4 ABA对佛波醇酯的诱导作用
第四节 小结与讨论
参考文献
参考书
附录
本文创新点
论文发表
申请专利
致谢
