TB患者NKT细胞数量与功能的研究及α-GalCer对Mtb感染后小鼠体内NKT细胞功能的影响

摘要

结核杆菌是导致人类死亡的重要病原体之一，全世界每年大约有800万新发活动性结核，200万因为结核病而死亡，1/3的人口被结核杆菌感染，其中5-10％发展为活动性结核，这个比例在HIV感染者中更高。已经成为发展中国家的重要公共卫生问题。BCG疫苗被证明是有效的，它可以预防儿童时期的重症结核，比如结核性脑膜炎和粟粒性结核，其有效率为1/3435和1/9314。因此在TB高发区，BCG疫苗在小儿出生后即得到接种。但是大量研究表明，BCG疫苗对于肺结核的预防效果受到质疑，因此迫切需要更深入的探讨机体结核杆菌的免疫应答以便开发出新的疫苗。
　　NKT细胞是是一类T细胞免疫调节亚群，其数量和功能与自身免疫疾病和感染性疾病密切相关。NKT细胞作为高效的免疫效应和调节细胞，其功能多样，但最重要的功能是抑制Mtb以及其他致病性分支杆菌。在NKT细胞的胞浆中存在已预先存在的IFN-γmRNA，如NKT细胞表面的受体接受刺激信号后，则可以立即分泌IFN-γ，其分泌水平是CD4+细胞分泌水平的200倍。体内NKT细胞受到刺激后可以诱导DC细胞的成熟并加快递呈可溶性抗原，从而促使CD8+T细胞发挥细胞毒性作用。Mtb感染小鼠或者分支杆菌细胞壁提取物注射入小鼠体内可以诱导NKT细胞对Mtb产生强烈应答，例如，将牛BCG注射入小鼠后的8天，肺组织中的NKT细胞比原先增长6倍;感染后30天，NKT细胞数量才开始下降，并且其表面的NK1.1表达也同时下调。
　　以往研究可知NKT细胞识别脂质抗原，包括结核杆菌的脂质，在小鼠实验中已被证明能够成功诱导保护性免疫，有实验证实将结核杆菌的细胞壁脱蛋白以后，再注入小鼠体内，NKT细胞可以协助肉芽肿的形成。NKT细胞不仅能针对宿主结核杆菌感染产生保护力，甚至对HIV也具有杀伤活力，而研究证实HIV感染后，将大大增加机体对外源性和内源性结核杆菌的感染。因此在如何激活或者强化NKT细胞的活性是一个重要课题，这也是本研究着重解决的问题，同时也是本研究的创新所在，因此本研究分为两部分:
　　第一部分 研究TB患者体内NKT细胞的数量与功能
　　在此本部分中，将探讨TB患者与健康志愿者体内NKT细胞的数量及其功能的差异，其判断依据足NKT细胞的百分比、IL-4和IFN-γ胞内细胞因子的分泌量。
　　通过本部分研究，发现对于活动性TB患者来说，其体内的NKT细胞的百分比相对于健康对照者来说是显著下降的，
　　第二部分 α-GalCer对结核杆菌感染Balb/c小鼠体内NKT细胞功能的影响，研究结果显示:健康志愿者体内NKT细胞在受到刺激后，其IFN-γ分泌量上升，IL-4分泌未出现明显改变，TB患者体内NKT细胞在受到刺激后，其IFN-γ分泌量上升，IL-4分泌未出现明显改变，IL-4分泌未出现明显改变，健康志愿者体内NKT细胞数量显著高于TB患者体内NKT细胞的数量，在NKT细胞功能上，TB患者显著低于健康志愿者，二者具有统计学差异，在受到药物刺激后，患者体内IFN-γ阳性，tetramer+的NKT细胞显著高于健康对照组，IL-4阳性，tetramer+的NKT细胞显著低于健康对照组，T-SPOT对于TB的临床诊断具有重要指导作用。
　　研究发现在不同给药剂量，不同给药途径的情况下，α-GalCer活化NKT细胞的能力存在显著差异。在尾静脉给药途径中，合适给药剂量为1000ng/10ul;在滴鼻给药途径中，发现各剂量组之间无显著性差异。在给药剂量确定的情况下（1000ng/100ul静脉给药，1000ng/10ul滴鼻）静脉给药途径时，血清，支气管肺泡灌洗液，肺匀浆液中IFN-γ分泌量有显著差异，血清中为最高:采用滴鼻给药途径时，血清，支气管肺泡灌洗液，肺匀浆液中IFN-γ分泌量有显著差异，肺匀浆液中为最高。
　　通过本研究发现:无论何种给药方式，α-GalCer单独用药作用都不明显;首次应用α-GalCer联合RFP给药，结果显示该药物组合可治疗Mtb感染小鼠，与RFP单独给药组比较具有统计学差异，静脉给药作用更明显;本研究结果提示:在治疗后肺局部的各种炎症因子（Th1细胞因子和Th2细胞因子）总体趋势是下降的;发现α-GalCer滴鼻联合RFP给药能够显著降低小鼠肺组织局部的炎症反应。

目录

摘要

第一部分 TB患者体内NKT细胞的数量与功能的研究

一、前言

二、材料与方法

三、结果

四、结论

五、讨论

参考文献

第二部分 α-GalCer对结核杆菌感染后小鼠体内NKT细胞功能的影响

一、前言

第一节、α-GalCer免疫Balb／c小鼠最佳浓度和免疫途径的探讨

一、材料和方法

二、结果

三、结论

四、讨论

第二节：在不同给药途径情况下α-GalCer单药或与抗结核药(RFP)联合应用对Balb／c小鼠体内NKT细胞的影响

一、材料和方法

二、结果

三、结论

存在的不足之处

四、讨论

参考文献

综述 NKT细胞的研究进展

英文缩略词表

在读期间论文及获奖情况

致谢

声明