KRAS、Hmsh2、hMLH1基因多态性与肠道肿瘤性息肉及结直肠癌相关性研究

摘要

研究目的：本研究旨在通过检测肠道肿瘤性息肉患者血液、组织活检标本KRAS基因密码子12、13，hMSH2基因2783C/A位点(rs1802577)和hMLH1基因Va1384Asp位点(rs63750447)单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms，SNP)与结直肠癌患者间的表达差异及相似性，分析阐明肠道肿瘤性息肉与结直肠癌疾病分子发生机制及组织遗传学之间存在的相关性和临床意义。
　　 研究方法：选择海军总医院2011年2月至2013年2月共240例患者的血液及肠道组织标本为研究对象，其中实验组各120例肠道肿瘤性息肉患者血液、肠道组织标本，对照一组各80例结直肠癌患者血液、肠道组织标本，对照二组各40例正常人群血液、肠道组织标本，运用基因片段凝胶电泳及PCR-DNA序列分析法检测K-RAS基因密码子12、13，hMLH1基因错义突变Va1384Asp及hMSH2基因错义突变2783C/A。采用基因序列比对分析软件CodonCode Aligner和SPSS13.0软件分析比较实验组与各对照组样K-RAS、hMLH1及hMSH2基因SNPs突变差异性。
　　 结果：(1)120份肠道肿瘤性息肉患者血液及组织样品中，K-ras基因12、13密码子，hMSH2基因2783C/A位点SNPs突变率低于80份结直肠癌患者血液及组织样品目标基因SNPs突变率，统计学分析显示x2=15.476、29.670、10.811、16.618、33.538、7.898，P＜0.05，说明差异存在统计学意义。(2)120份肠道肿瘤性息肉患者血液及组织样品中，hMLH1基因Va1384Asp位点SNPs突变例数与80份结直肠癌患者血液及组织样品目标基因SNPs突变例数统计学分析显示x2=0.568、0.289，P＞0.05，说明差异不存在统计学意义。(3)120份肠道肿瘤性息肉患者血液及组织样品中除hMLH1基因Va1384Asp位点SNPs突变率高于40份正常人群血液及组织样品x2=10.486、4.876，P＜0.05，说明差异存在统计学差异，其余K-ras基因12、13密码子，hMSH2基因2783C/A位点SNPs突变率均无统计学差异，P＞0.05。
　　 结论：肠道肿瘤性息肉患者血液、组织活检标本K-RAS、hMSH2基因SNPs突变率与结直肠癌患者血液、组织活检标本存在显著性差异，且与正常人群血液、组织活检标本突变率相近，无统计学差异。肠道肿瘤性息肉患者血液及组织标本hMLH1基因SNPs与结直肠癌组间无统计学差异，且与正常人群血液、组织活检标本间存在统计学差异。以上提示肠道肿瘤性息肉与结直肠癌疾病在组织遗传学或分子事件发生机制可能具有密切相关性及重要临床意义。

目录

声明

摘要

中英文缩略词表

前言

材料与方法

一、一般资料

二、血液样本采集

三、大肠息肉样本采集

四．候选基因位点的确立

五．实验用仪器与设备

六．基因组DNA提取

七．引物设计与合成

八．PCR扩增反应

九．候选基因位点测序和突变分析

十、统计学分析

结果

一、研究对象一般资料

二、K-RAS基因密码子12、13SNPs的比较

三、hMLH1基因Va1384AspSNPs的比较

四、hMSH2基因2783C／ASNPs的比较

五、目标基因SNPs位点错义突变测序

讨论

一、SNP在医疗临床领域研究进展及运用

二、结直肠癌癌前病变与结直肠肿瘤性息肉研究

三、目标基因SNP突变遗传学意义

四、肠道肿瘤性息肉目标基因SNP检测结果分析

五、本研究的不足之处

六、展望

结论

参考文献

综述

知情同意书

攻读学位期间发表文章

致谢