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第一章文献综述
1乳铁蛋白研究进展
1.1乳铁蛋白的分布与结构
1.2乳铁蛋白的一级结构保守性与功能关系
1.3乳铁蛋白的生物学功能
1.4乳铁蛋白的应用
2胸腺肽α 1研究进展
2.1 T α 1的分布
2.2 T α 1的理化特点
2.3 T a 1的生物学功能
2.4 T α 1的应用
3人乳铁蛋白与胸腺肽的异源表达系统的进展
3.1乳铁蛋白异源表达系统的研究
3.2胸腺肽α 1异源表达系统研究进展
4透明颤菌血红蛋白研究进展
4.1 VHb结构
4.2 VHb的生理特点及生理功能
4.3 VHb的作用机理
4.4 VHb的应用
5研究目的与意义
第二章人乳铁蛋白基因合成及人乳铁蛋白胸腺肽融合基因的研制
1实验材料
1.1菌株
1.2有关的质粒
1.3主要试剂
1.4人工合成的寡核苷酸片段
1.5培养基
1.6 T α 1hLf融合基因PCR引物
2方法
2.1质粒DNA的小量提取
2.2质粒DNA的大量制备
2.3 DNA的限制性酶切反应
2.4目的DNA片段的电泳回收
2.5融合基因的PCR扩增
2.6载体与DNA的连接反应
2.7大肠杆菌感受态细胞的制备
2.8质粒DNA转化大肠杆菌
3结果与分析
3.1人乳铁蛋白基因的分子设计
3.2人乳铁蛋白基因的合成
3.3人乳铁蛋白基因hLf与胸腺肽基因T1(Tα1)的融合
4讨论
5小结
第三章Tα1hLf和vgb在毕赤酵母中表达
1材料
1.1菌种
1.2-本研究中应用的主要质粒
1.3培养基
1.4试剂及仪器
1.5 PCR引物
2方法
2.1质粒DNA的小量提取
2.2质粒DNA的大量制备
2.3 DNA的限制性酶切反应
2.4目的DNA片段的电泳回收
2.5粘端连接
2.6基因的PCR扩增
2.7大肠杆菌感受态细胞的制备
2.8质粒DNA转化大肠杆菌
2.9蛋白质的SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)
2.10 Western bolt鉴定
2.11毕赤酵母感受态细胞的制备
2.12酵母的电击转化及重组子的初筛
2.13酵母重组子甲醇利用型的确定
2.14分泌型转化子的筛选
2.15酵母总DNA的提取
2.16酵母胞内蛋白的检测
2.17转化子的摇瓶表达研究
2.18融合蛋白中乳铁蛋白抑菌活性检测
2.19 VHb的定性方法
2.20不同供氧条件下胞内表达的VHb对毕赤酵母生长的影响
2.21菌密度的测定
3结果与分析
3.1表达载体构建
3.2表达载体的鉴定
3.3重组载体转化毕赤酵母及重组酵母的筛选
3.4分泌型转化子的筛选
3.5重组子的PCR检测
3.6 SDS-PAGE蛋白检测
3.7利用人乳铁蛋白抗原Western Blotting检测融合蛋白
3.8表达产物的生物活性检测
3.9贫氧条件对酵母菌体生长影响的研究
3.10酵母转化子的摇瓶诱导表达分析
4 讨论
5 小结
第四章Tα1hLf和vgb基因在生菜中表达
1材料
1.1菌株与植物材料
1.2有关的质粒
1.3培养基
1.4试剂及仪器
2方法
2.1质粒DNA的小量提取
2.2质粒DNA的大量制备
2.3 DNA的限制性酶切反应
2.4目的DNA片段的电泳回收
2.5粘端连接
2.6大肠杆菌感受态细胞的制备
2.7质粒DNA转化大肠杆菌
2.8蛋白质的SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)
2.9根瘤农杆菌感受态细胞的制备
2.10表达载体转化根癌农杆菌
2.11生菜无菌苗的培养
2.12农杆菌介导的叶盘法转化生菜
2.13 Kan抗性植株的筛选
2.14再生苗诱导生根
2.15无菌苗的移栽
2.16生菜基因组DNA的提取
2.17转基因植株的PCR检测
2.18生菜总蛋白提取
2.19 ELISA检测融合蛋白中人乳铁蛋白的表达
2.20生菜表达的VHb蛋白差示光谱检测
3结果分析
3.1融合基因植物表达表达载体构建
3.2表达载体鉴定
3.3表达载体转化农杆菌
3.4农杆菌介导转化生菜
3.5 PCR检测再生苗
3.6 ELASA分析转基因苗中融合蛋白表达情况
3.7差示光谱分析VHb蛋白
4讨论
5小结
结论
参考文献
附录1
附录2
附录3
致谢
作者简介
