杆状病毒AcMNPV复制依赖于宿主细胞脂肪酸合成途径

摘要

苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒（Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus, AcMNPV）是杆状病毒代表种。在AcMNPV感染周期中，病毒粒子转运需要的能量、病毒蛋白酰基化修饰、核衣壳囊膜化引发的核膜和质膜重构、以及病毒诱导的大量核内微囊泡的形成等过程与宿主细胞脂肪酸合成途径密切相关，但其分子机理尚不清楚。
　　为了揭示宿主脂肪酸合成途径在AcMNPV侵染中的作用，本文首先解析了AcMNPV感染后不同时间宿主细胞内参与脂肪酸合成的乙酰辅酶A羧化酶（Acetyl-CoA carboxylase，ACC）和脂肪酸合成酶（Fatty acid synthase，FASN）的转录水平变化。研究发现，AcMNPV感染造成ACC的表达水平显著下降；而在病毒感染早期（6 h之前）， FASN的转录水平则显著上调。采用5-25μM C75抑制FASN活性对Sf9细胞没有显著毒性，但AcMNPV感染性BV的产量却显著或极显著下降，表明宿主脂肪酸合成途径参与AcMNPV侵染过程。
　　定性和定量分析表明，在AcMNPV感染后1小时用C75抑制FASN活性造成病毒早、晚期启动子指导下的β-半乳糖苷酶和β-葡萄糖醛酸酶，以及病毒囊膜蛋白GP64的表达水平显著下降。此外，C75处理也导致AcMNPV基因组DNA复制效率显著降低，揭示宿主脂肪酸合成途径与病毒侵染早期阶段有关。深入分析发现，在病毒感染前或接种病毒时用C75处理Sf9细胞对感染性BV的产生没有显著影响，而在病毒感染后1、3或6小时用C75处理Sf9细胞则造成感染性病毒粒子的滴度极显著下降，表明AcMNPV入侵宿主细胞不依赖于FASN活性。
　　综上所述，我们的研究结果表明宿主细胞脂肪酸合成途径与AcMNPV侵染有关，该途径可能为病毒基因表达及核衣壳囊膜化提供能量及磷脂成分，详尽的分子机理尚需深入研究。

目录

声明

第一章 文献综述

1.1 杆状病毒简介

1.1.1 杆状病毒应用及分类

1.1.2 杆状病毒粒子

1.1.3 杆状病毒感染周期

1.2 脂肪酸合成途径

1.2.1脂肪酸合成途径

1.2.2脂肪酸合成酶

1.2.3 脂肪酸合成酶抑制剂

1.3 脂肪酸合成途径与病毒侵染关系

1.3.1 脂肪酸合成途径与病毒入侵相关

1.3.2 脂肪酸合成途径参与病毒复制

1.3.3 脂肪酸合成途径参与病毒粒子的组装和出芽释放

1.3.4 脂肪酸合成途径为病毒复制提供能量

1.4 研究对象及意义

第二章 材料与方法

2.1 材料

2.1.1 细胞、病毒与质粒

2.1.2 试剂、试剂盒与抗体

2.1.3溶液

2.1.4 主要仪器设备

2.2 方法

2.2.1 C75的细胞毒性检测

2.2.2 C75对AcMNPV感染性病毒粒子（BV）复制影响的检测

2.2.3 C75对AcMNPV基因表达及基因组DNA复制影响的检测

2.2.4 C75不同时间处理对AcMNPV感染性病毒粒子（BV）复制影响的检测

2.2.5 Western blot分析

第三章 结果与分析

3.1 AcMNPV感染显著上调宿主细胞脂肪酸合成酶表达水平

3.2低浓度C75对Sf9细胞没有毒性

3.4抑制宿主细胞FASN活性显著降低AcMNPV基因表达及基因组DNA复制

3.5 AcMNPV入侵宿主细胞不依赖于宿主细胞FASN活性

第四章 讨论

参考文献

致谢

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