重组类人胶原蛋白HIC-I对BHK-21细胞影响实验研究

摘要

本文以BHK-21细胞为对象，通过系列体外细胞试验，研究类人胶原蛋白-Ⅰ(Human-likeCollagen-Ⅰ，HLC-Ⅰ)对细胞生长的影响。主要研究内容： 1.类人胶原蛋白-Ⅰ对BHK-21细胞生长的促进作用。取BHK-21细胞培养，消化传代，测定其生长曲线。以各浓度类人胶原蛋白HLC-Ⅰ作用于细胞，在不同时间段(24hr，48hr，72hr，96hr，120hr)分别做MTT检测，胎盘兰染色，并选取HLC-Ⅰ浓度为0.4‰作用下的细胞做细胞分裂指数测定，研究HLC-Ⅰ对细胞生长的促进作用，实验数据均进行统计学分析。结果表明，类人胶原蛋白-Ⅰ浓度为0.3‰及0.5‰对于MTT检测A490值、增殖率有积极影响，1.3‰时则有消极影响。胎盘兰染色得到细胞存活率，各浓度梯度类人胶原蛋白-Ⅰ对于细胞存活率均无明显影响，显著性因子P＞0.05。细胞分裂指数测定结果表明HLC-Ⅰ(0.4‰，w/v)在培养48hr后，对细胞分裂有正面影响。HLC-Ⅰ对于BHK-21细胞系的细胞生长在低浓度范围内有明显的促进作用，对于细胞的存活率则无显著影响，因此推断其具有良好的促细胞生长特性。 2.类人胶原蛋白-Ⅰ的促BHK-21细胞生长机制。HLC-Ⅰ浓度为0.1‰，0.2‰，0.3‰(w/v)，作用于细胞24hr，用LDH检测，流式细胞分析，细胞形态学观察，研究HLC-Ⅰ促细胞生长的机制，实验数据均进行统计学分析。结果表明，作用24hr时，HLC-Ⅰ对于细胞培养液中LDH浓度无显著性影响，P＜0.05，HLC-Ⅰ(0.1‰，0.2‰，0.3‰，w/v)作用后的细胞凋亡百分数变化不大，进一步作周期分析，HLC-Ⅰ(0.1‰，0.2‰，0.3‰，w/v)作用24hr后也无显著影响，形态学观察反映出HLC-Ⅰ(0.1‰，0.2‰，0.3‰，w/v)对于细胞形态有加长作用。推测作用24hr时，HLC-Ⅰ可能通过影响细胞膜、增强细胞贴壁生长而促进细胞生长。 3.类人胶原蛋白-Ⅰ对BHK-21细胞生长影响的数学模型。根据MTT检测结果作HLC-Ⅰ浓度c及作用时间t对BHK-21细胞生长影响的双参数模型F(c,t)=K(c)/1+(K(c)/N(c)-1)e-u(c)t,R2=0.9632。

目录

文摘

英文文摘

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第一章综述

1胶原蛋白

2胶原蛋白的生物学功能

3胶原蛋白的细胞学研究现状

4重组类人胶原蛋白

5研究目的及意义

第二章实验材料

1实验试剂

2主要仪器

3试剂配制

第三章实验方法

1细胞培养

2 MTT检测及细胞增殖率计算

3细胞存活率测定

4细胞分裂指数测定

5 LDH检测

6流式细胞分析

7细胞形态观察

8数学分析方法

9重组类人胶原蛋白-Ⅰ对细胞生长影响数学模型的建立

第四章实验结果

1 BHK-21细胞生长曲线

2 MTT检测结果

3细胞增殖率

4细胞存活率

5细胞分裂指数

6 HLC-Ⅰ对培养液中LDH的影响

7流式检测结果

8形态学观察结果

9类人胶原蛋白-Ⅰ对细胞生长影响数学模型的建立

第五章结果讨论

1类人胶原蛋白-Ⅰ对BHK-21细胞的促生长作用

2类人胶原蛋白-Ⅰ的促BHK-21细胞生长机制

3类人胶原蛋白-Ⅰ对细胞生长影响的数学模型

4总论

第六章工作展望

参考文献

致谢