HSP60、HSP70、HSP90α在大肠癌发生发展中的作用

摘要

大肠癌(Colorectalcarcinoma，CRC)是全世界第三大常见的恶性肿瘤，每年全球约有94万多人发生该病，近50万人死于大肠癌。大肠癌在我国也是最常见的恶性肿瘤之一，目前虽然还位列第四号肿瘤，但增长的速度却非常快，尤其是在一些大城市。目前，HSPs家族成员在某些恶性肿瘤的发生发展中的作用已有一些报道，如HSP70在乳腺癌、胃癌、肺癌及肝癌等组织中高表达，HSP60在舌鳞癌、胰腺癌和乳腺癌等肿瘤中高表达，但是这一家族成员HSP60、HSP70、HSP90α在大肠癌组织中的表达情况的系统研究国内外还未见报道。 目的： 研究大肠癌组织中HSP60、HSP70、HSP90α的mRNA及其蛋白的表达情况，并分析其与病理类型及预后的关系，探讨HSP60、HSP70、HSP90α在大肠癌发生发展中的作用，为实验室进一步研究热休克蛋白是否与大肠癌的致病机理有关提供基础资料，为研究其是否可以作为大肠癌的临床早期诊断、治疗的靶点提供实验依据。 方法： 1.收集大肠癌组织及其癌旁2cm处组织的新鲜标本各49例，立刻放入液氮中冷冻2-3小时后可转入-70℃冰箱保存或着一直保存在液氮中。 2.采用RT-PCR方法，测定HSP60、HSP70、HSP90α的mRNA在大肠癌组织及其癌旁组织中的表达情况。 3.采用免疫组化方法及Western-blot方法测定HSP60、HSP70、HSP90α蛋白在大肠癌组织及其癌旁组织中的表达情况。 结果： 1.应用RT-PCR方法检测HSP60、HSP70、HSP90α在大肠癌组织及其癌旁组织的mRNA的表达的相对水平分别为：HSP60/B-actin的(X-±s)：0.989±0.223与0.674±0.131；HSP70/β-actin的(X-±S)：0.873±0.217与0.526±0.156；HSP90α/β-actin的(X±S)：0.953±0.228与0.518±0.194。经t检验，均为p＜0.05。因此，大肠癌组织中HSP60、HSP70、HSP90α的mRNA的表达均显著高于癌旁组织，有生物统计学意义。 2.应用免疫组化方法测定大肠癌组织中HSP60、HSP70和HSP90α蛋白的表达情况明显增高，癌组织及其癌旁组织两组之间HSP60、HSP70和HSP90α表达率有明显差异(HSP60:77.6％及26.7％，x2=5.34，P＜0.05；HSP70:83.7％及34.7％，x2=24.33，P＜0.05；HSP90:81.6％及28.6％，x2=27.88，P＜0.05)；癌组织及其癌旁组织之间HSP60、HSP70和HSP90α的表达率亦有明显差异(HSP60:61.2％及10.2％，x2=27.78，P＜0.05；HSP70:65.3％及12.2％，x2=29.06，P＜0.05；HSP90α：53.1％及14.2％，x2=16.49，P＜0.05)。在蛋白水平证明三种HSPs在癌组织中的表达明显高于癌旁组织。但是，HSP60、HSP70及HSP90α在大肠癌高分化腺癌、中分化腺癌、低分化腺癌的表达率和过表达率均无明显差异(HSP60：表达率：71.4％，73.9％，86.7％，x2=1.035，P＞0.05；过表达率：57.1％，60.9％，73.3％，x2=0.810，P＞0.05。HSP70：表达率：71.4％，82.6％，86.7％，，x2=5.895，P＞0.05；过表达率：57.1％，60.9％，66.7％，x2=0.405，P＞0.05。HSP90α：表达率：71.4％，82.6％，86.7％，x2=0.72，P＞0.05；过表达率：42.9％，56.5％，53.3％，x2=0.36，P＞0.05)。 3.应用Western-blot方法测定HSP60、HSP70、HSP90α在大肠癌组织和癌旁组织中的表达情况分别为：HSP60/β-actin的(X±S)：1.360±0.168与0.446±0.086；HSP70/β-actin的(X±S)：0.955±0.247与0.405±0.125；HSP90α/β-actin的(X±S)：0.873±0.199与0.364±0.108。经t检验，亦均为P＜0.05。因此，根据此方法也显示了大肠癌组织中HSP60、HSP70、HSP90α的蛋白的表达均显著高于癌旁组织，亦有生物学统计意义。 结论： 应用RT-PCR方法检测出大肠癌组织HSP60、HSP70、HSP90α的mRNA的表达显著高于其癌旁组织。应用免疫组化与Western-blot方法检测出大肠癌组织HSP60、HSP70、HSP90α蛋白表达水平亦显著高于其癌旁组织，证明这三种蛋白在大肠癌的发病机理中可能起一定作用，为进一步探索其在大肠癌中的作用提供了线索。

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文摘

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论文说明：主要符号表

声明

前言

1 热休克蛋白(HSPs)与肿瘤

2 本课题研究的目的及意义

第一部分 大肠癌中ttSP60、HSP70、HSP90 α的mRNA表达水平研究

1 材料和方法

1.1实验材料

1.2主要实验仪器

1.3主要实验试剂

1.4半定量RT桺CR法分析大肠癌组织中HSP60、HSP70、HSP90 α mRNA的表达

2 结果

2.1 半定量RT-PCR的代表性电泳图象

2.2 HSP60、HSP70、HSP90 α mRNA表达的半定量分析

3 讨论

4 结论

第二部分 HSP60、HSP70、HSP90 α三种热休克蛋白在大肠癌中的表达情况研究

1 免疫组化法检测三种HSP蛋白的组织表达部位和强度

1.1实验材料

1.2实验仪器

1.3主要实验试剂

1.4 方法

2 Western-blot法测定三种HSP蛋白的表达量

2.1实验材料

2.2 实验仪器

2.3 主要实验试剂

2.4 提取组织总蛋白

2.5 Western-blot操作步骤

3 结果

3.1 免疫组化检测三种蛋白的实验结果

3.2 Western-blot实验结果

4 讨论

5 结论

全文小结

参考文献

综述 热休克蛋白家族成员与肿瘤发生发展的关系

在学期间已、待发表文章

致谢

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