包裹长春新碱抗CD20脂质体靶向杀伤黑色素瘤干细胞研究

摘要

黑色素瘤是一种主要发病于皮肤上的恶性黑色素细胞肿瘤。它是一种罕见的皮肤癌,其恶性程度较高,在皮肤癌中致死率非常高。目前唯一有效的治疗方式是在肿瘤厚度未达到1毫米时手术切除肿瘤。在肿瘤较浅时的病损5年治愈率可达到100％。所以治愈率取决于早期诊断和早期治疗。黑素瘤的预后较差,中晚期患者五年生存率只有10％左右,所以当黑色素肿瘤细胞扩散后致死率极高。
　　黑色素瘤细胞的前体细胞来自于突变的黑色素瘤干细胞(MMSC),所以首先把黑色素瘤干细胞通过药物清除掉,对于黑色素瘤的发生发展起到了完全扼制作用。目前对黑色素瘤的治疗手段不敏感,所需要的药物剂量特别大。研究发现黑色素瘤干性细胞表达 CD20抗原,那么此表型分子可作为纳米药物的理想靶点;并且在使用纳米脂质体包裹药物递送到目的细胞,可降低用药量,和药物副作用。
　　纳米脂质体已被广泛应用到改善传统的癌症治疗策略。以纳米脂质体为载体的基础化疗药物,可以降低化疗药物的副作用,并且有效地防止药物快速降解,很好的改变了药代动力学,并可以在肿瘤部位富集;增加了在肿瘤部位的药物浓度。在过去的二十年中,大量的化疗药物被包裹在纳米载体中,这些药物已进入临床开发或已被批准临床应用。在批准的临床药物产品中以生物可降解的聚合物纳米粒子和脂质体占据多数。脂质体是一种单层或双层磷脂双分子膜形成的球型纳米载体,因为低毒性、生物相容性好、可降低用药剂量、并有效避免耐药性等特性,目前已被广泛应用。最近,一些脂质体药物制剂已被批准在临床使用,其中Doxil是第一个被批准的脂质体形式的化疗药物,于1995年上市。脂质体缺陷之一是无法控制药物释放。脂质体虽然可以聚集在生物体内的肿瘤,但其靶向性较低;而脂质体偶联抗体(免疫脂质体)既具有靶向性又可以高效地将药物递送到肿瘤部位。免疫脂质体作为靶向制剂的一种,具有低毒性、生物相容性好、可降低用药剂量、并有效避免耐药性、长效、被包封药物得到有效地保护、靶向性更为精确、有效地控制药物释放和提高病人用药顺应性等优点。
　　本课题中的黑色素瘤细胞对化疗药物多柔比星有很高的抗药性,于是我们选择了使用鞘磷脂作为脂质体的脂材,包裹长春新碱,并连接上CD20抗体;组装成一免疫脂质体使其具有靶向性、较好的生物相容性以及较低的用药量。我们通过流式细胞仪检测制备的脂质体可以很好地靶向黑色素瘤干细胞。使用马尔文粒径仪检测制备的脂质体粒径均一,符合用药要求。利用分光光度计测定了脂质体的药物包封率和体外释放药物动力学。在体外体内验证脂质体可以有效的靶向杀伤黑色素瘤干细胞和黑色素瘤细胞。这种连接有CD20抗体主动靶向功能的免疫脂质体显示出强大的应用潜力,对临床化疗及纳米抗肿瘤载体设计具有指导意义。

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前言

第一章 靶向纳米脂质体的制剂学研究及性质研究

1.1实验材料与仪器

1.2实验方法

1.3 实验结果

1.4 讨论与小结

第二章 包裹长春新碱的免疫脂质体的体外抗肿瘤活性研究

2.1实验材料和仪器

2.2 实验方法

2.3实验结果

2.4讨论与小结

第三章 包裹长春新碱的抗CD20纳米脂质体的体内抗肿瘤活性研究

3.1实验材料和仪器

3.2实验方法

3.3实验结果

3.4结论与小结

参考文献

附录

致谢

攻读学位期间发表的学术论文