降钙素基因相关肽对去甲肾上腺素诱导乳鼠心肌细胞凋亡的影响及其机制研究

摘要

研究背景：相关研究表明，在急性心肌缺血时心肌组织中降钙素基因相关肽(CGRP)、去甲肾上腺素(NE)水平都明显升高，肾上腺素能系统与感觉神经都参与了心肌缺血的损伤与保护，然而其作用机制尚未阐明。本实验欲从细胞水平阐述其作用，及其机制。
　　 目的：观察降钙素基因相关肽(CGRP)对去甲肾上腺素(NE)诱导乳鼠心肌细胞凋亡的影响，及其与PKA、PKC信号传导系统的关系。
　　 内容及方法：
　　 (1)心肌细胞的培养及鉴定。实验选用1-3 d龄的Sprague-Dawley(SD)大鼠建立新生大鼠心肌细胞体外培养模型，采用免疫细胞化学染色(SABC法)对心肌细胞进行鉴定。
　　 (2)CGRP对NE诱发的心肌细胞凋亡的影响采用NE与PKA抑制剂H89、CGRP、CGRP受体拮抗剂CGRP8-37配伍，形成以下组合：对照组(C组)、NE(10-5M)组、NH(NE10-5M+H893×10-5M)组、NC组(NE10-5M+CGRP10-8M)、NC8组(NE10-5M+CGRP10-8M+CGRP8-3710-7M)，用TUNEL法检测心肌细胞凋亡，计算心肌细胞凋亡率。
　　 (3)CGRP对NE诱导心肌细胞PKA信号途径的影响分组同实验2，提取培养心肌细胞蛋白，用无反射性试剂盒检测各组PKA活性
　　 (4)CGRP对NE诱导心肌细胞PKC信号途径的影响分为C组、NE组、NC组、NC8组(具体同实验2)，提取培养心肌细胞蛋白，用无反射性试剂盒检测各组PKC活性
　　 结果:
　　 (1)心肌细胞培养成功，可见同步化搏动心肌细胞，免疫组化鉴定成功，98％以上细胞为心肌细胞。
　　 (2)a：与对照组相比，NE组、NC8组细胞凋亡率显著升高；b：与NE组比较，NH组、NC组细胞凋亡率明显降低(P＜0.05)。
　　 (3)a：与对照组相比，NE组、NC组PKA活性升高，NH组PKA活性降低(P＜0.05)；b：.NC组、NC8组与NE组的差别无统计学意义(P＞0.05)；c：.NC组与NC8组的差异有统计学意义(P＜0.05)。
　　 (4)a：与对照组比较，NE组、NC组、NC8组PKC活性均增高(P＜0.05)；b：NE组、NC组、NC8组之间PKC活性无明显差异(P＞0.05)。
　　 结论:
　　 1.PKA信号通路可能参与NE诱导心肌细胞凋亡。
　　 2.CGRP有拮抗NE诱导的心肌细胞凋亡作用。
　　 3.CGRP不是通过对PKA或者PKC信号通路的调节，抑制NE诱导心肌细胞凋亡。其作用机制有待探讨。

目录

文摘

英文文摘

前言

论文说明：英文缩略语

声明

第一部分 文献综述

一、去甲肾上腺素(NE)与心肌缺血

(一)心脏的神经支配

(二)心脏肾上腺素能受体(AR)

(三)急性心肌缺血时交感-肾上腺素能活性

(四)去甲肾上腺素对心肌细胞凋亡的影响

二.降钙素基因相关肽的研究进展

1 CGRP的发现

2 CGRP的结构

3 CGRP的合成

4 CGRP释放的调节

5 CGRP的分布

6 CGRP受体

7 CGRP的主要生物学作用

8小结

第二部分 实验研究

实验一 乳鼠心肌细胞培养模型的建立

1.实验材料

2.实验方法

3结果

4讨论

实验二 CGRP对NE诱发的心肌细胞凋亡的影响

1.实验材料

2、实验分组及方法

3.结果

4.讨论

实验三 CGRP对NE诱导心肌细胞PKA信号途径的影响

1.实验材料

2.实验分组及方法

3.结果

4.讨论

实验四 CGRP对NE诱导心肌细胞PKC信号途径的影响

1.实验材料

2.实验分组及方法

3.结果

4.讨论

第三章 结论和意义

结论

意义

参考文献

附录

个人简介

致谢