组蛋白去乙酰化酶抑制剂LBH589诱导多发性骨髓瘤细胞凋亡及其逆转耐药机制研究

摘要

目的：
　　 探讨新一代组蛋白去乙酰化酶抑制剂LBH589单药或者联合蛋白酶体抑制剂硼替佐米对多发性骨髓瘤(MM)细胞产生的效应及其产生效应的分子机制，为寻找肿瘤治疗新靶点提供实验依据。
　　 方法：
　　 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测(0、10、20、50nmol/L)LBH589及50nmol/LLBH589分别联合(10、20nmol/L)硼替佐米作用MM细胞(U266、对地塞米松耐药的MMIR)24,48h后的生长抑制作用，采用流式细胞术检测作用MMIR细胞48h后对细胞周期和细胞凋亡的影响，采用Western blot分析(0、10、20、50nmol/L) LBH589作用MMIR细胞24h后histone H4乙酰化的表达程度及PARP基因、BCL-X基因的表达变化，采用实时荧光定量PCR分析(0、20、50nmol/L)LBH589分别作用MMIR细胞24,48h后caspase-3基因、APAF-1基因以及TOSO基因的表达变化。
　　 结果：
　　 1.MTT结果显示LBH589单药及与硼替佐米联合均能够抑制U266和MMIR细胞生长，并与药物浓度和作用时间呈正相关，呈剂量-时间依赖性，且LBH589与硼替佐米联合组作用均较单药组明显（p均＜0.05）；
　　 2.LBH589单药及与硼替佐米联合作用MMIR细胞48h后，流式细胞术结果显示G0/G1期细胞逐渐增多，G2/M期及S期细胞逐渐减少，细胞阻滞在G0/G1期，同时可见MMIR细胞的凋亡率增加，作用呈剂量依赖性，且LBH589与硼替佐米联合组作用均较单药组明显（p均＜0.05）；
　　 3.Westem blot分析显示不同浓度LBH589作用MMIR细胞24h后随着药物浓度的增加，histone H4乙酰化的程度表达逐渐上调，PARP基因的表达也逐渐上调，而BCL-X基因的表达则逐渐下调，变化呈剂量依赖性(p＜0.05）。
　　 4实时荧光定量PCR分析显示不同浓度LBH589作用MM1R细胞24、48h后随着药物浓度的增加和时间的延长，caspase-3基因、APAF-1基因的表达是逐渐上调的，而TOSO基因的表达则是逐渐下调的，变化呈剂量．时间依赖性(p＜0.05）。
　　 结论：
　　 1.LBH589对人多发性骨髓瘤细胞(U266，MM1R)具有生长抑制作用。
　　 2.LBH589通过阻滞细胞周期，诱导细胞凋亡发挥其对U266，MM1R细胞的生长抑制作用。
　　 3.LBH589与硼替佐米联合对骨髓瘤细胞作用有协同效应。
　　 4.LBH589可激活促凋亡基因APAF-1，使caspase-3、PARP基因的表达上调，通过caspase途径诱导骨髓瘤耐药细胞凋亡。
　　 5.LBH589可促进多发性骨髓瘤耐药细胞中的组蛋白高度乙酰化使TOSO及BCL-X基因表达降低从而逆转耐药，重新促进细胞凋亡。

目录

声明

摘要

缩略词

前言

第一章 材料及方法

第二章 结果

第三章 讨论

第四章 结论

参考文献

附图

附表

综述

个人简介

致谢