凤尾兰提取物抑菌活性研究

摘要

本文以意大利青霉(Penicillium italicum)、指状青霉(Penicilliumdititatum)、蒜薹灰葡萄孢(Botrytis cinerea Pers．)、葡萄灰葡萄孢(Botryiseinerea．Pers．)和葱腐葡萄孢(Botrys allii Munn)为供试菌，研究了凤尾兰提取物的抑菌活性，以及温度、紫外线对提取物活性的影响；凤尾兰提取物的最佳提取方法；提取物的安全性以及对蒜薹、柑橘腐烂的抑制效果；并对该提取物中的抑菌成分进行了初步分离和定性鉴定。得出以下结论： 1 用60％乙醇(V/V)溶液提取凤尾兰叶，然后用滤纸片扩散法测定其对几种主要果蔬致病菌的抑制作用，用二倍稀释法确定提取液的最小抑菌浓度(MIC)，并进一步研究了提取物对温度、紫外线的稳定性。结果表明，凤尾兰60％乙醇提取液对蒜薹灰葡萄孢、葱腐葡萄孢、指状青霉和葡萄灰葡萄孢有较明显的抑制效果，而对意大利青霉没有抑制作用。提取液对蒜薹灰葡萄孢、葱腐葡萄孢、指状青霉和葡萄灰葡萄孢的最小抑菌浓度分别为0.0625h/mL、0.125h/mL、0.125g/mL和0.25g/mL。提取液浓度不同，对指状青霉抑菌效果差异显著(P<0.05)，加热和紫外线照射对提取物的抑菌效果无显著影响(P>0.05)。 2 用传统浸提法、微波法、超声波法三种方法对凤尾兰中的抑菌物质进行提取，通过正交实验确定其相应的优化工艺条件。实验结果表明：传统浸提法提取的最佳条件为乙醇浓度45％，料液比1g：15mL，提取温度70℃，提取时间为2h；微波法提取的最佳条件为乙醇浓度45％，料液比lg：15mL，微波功率320W，提取时间3min。超声波法提取的最佳条件为乙醇浓度45％，料液比1g：15mL，提取温度50℃，提取时间10min。传统浸提法、微波提取法、超声波提取法提取凤尾兰中的抑菌物质对指状青霉的抑菌圈直径分别为15.8mm、22.6mm和24.3mm。与传统的浸提法相比，超声波与微波提取凤尾兰中的抑菌成分具有提取温度低、时间短等优点，且所得提取物的抑菌效果好。 3 通过急性毒理试验发现，试验动物经口LD<,50>>15000mg/kg.bw，说明凤尾兰提取物属无毒物质。 4 本研究探讨不同浓度的凤尾兰提取物对蒜薹灰葡萄孢和葱腐葡萄孢引起腐烂的抑制作用。结果表明，凤尾兰提取物对灰葡萄孢和葱腐葡萄孢引起的蒜薹腐烂具有较好的抑制作用，2.5g/L、5g/L、10g/L和15g/L的凤尾兰提取物均能有效抑制蒜薹灰葡萄孢和葱腐葡萄孢的侵染，减少蒜薹腐烂，其中以10g/L的处理效果最佳。 5 为减轻指状青霉对柑橘的侵染，本研究探讨了不同浓度(2.5g/L、5g/L、10g/L、15h/L)凤尾兰提取液对柑橘腐烂的抑制作用。结果表明，2.5、5、10、15g/L凤尾兰提取液对指状青霉的致病性及自然发病柑橘腐烂均有明显的抑制作用，其中10g/L处理对指状青霉的致病性具有显著的抑制作用(P<0.05)，5h/L处理对柑橘腐烂具有显著的抑制作用(P<0.05)。 6 试验结果表明各萃取物中只有正丁醇萃取物(0.05g/mL)对各供试菌葱腐葡萄孢、指状青霉、蒜薹灰葡萄孢有抑菌效果，其抑菌圈分别达13.5mm、19.6mm、20.7mm；正丁醇萃取物通过两次柱层析后，浓度为10mg/m:，的Ⅱ1-Ⅱ10对各供试菌葱腐葡萄孢、指状青霉、蒜薹灰葡萄孢的抑菌圈直径为16.2mm、22.3mm和24.2mm。定性测定结果表明，提取物含有黄酮类、有机酸及皂苷类等成分，而不含有生物碱、酚类、葸醌及其甙类。

目录

声明

摘要

1引言

1.1植物源抑菌活性物质研究概况

1.1.1具有抑菌活性物质的植物资源

1.1.2植物中的有效抑菌成分

1.1.3植物源抑菌活性物质的抑菌作用机理

1.1.4植物源抑菌活性物质在食品保鲜中的应用现状

1.1.5植物源抑菌活性物质在食品保鲜中的应用前景

1.1.6植物抑菌活性物质的提取方法

1.2凤尾兰研究概况

1.2.1形态学特征、生物学特性及地理分布

1.2.2化学成分研究

1.2.3药理活性研究

1.3本课题研究的目的、意义和内容

1.3.1研究的目的、意义

1.3.2研究内容

1.3.3研究方法

1.3.4研究路线

2材料与方法

2.1试验材料

2.2主要试剂

2.3主要仪器

2.4试验方法

2.4.1凤尾兰提取物的制备

2.4.2离体试验抑菌活性测定

2.4.3凤尾兰提取物大鼠急性经口毒性试验

2.4.4凤尾兰提取物在蒜薹、柑橘保鲜中的应用

2.4.5凤尾兰抑菌成分的提取与初步分离

2.4.6活性成分的粗测

2.5数据分析

3结果与分析

3.1凤尾兰乙醇提取液的抑菌活性及其性质

3.1.1凤尾兰提取液的抑菌效果

3.1.2凤尾兰提取液最低抑菌浓度(MIC)的测定

3.1.3凤尾兰提取液浓度对抑菌效果的影响

3.1.4热处理对凤尾兰提取物抑菌作用的影响

3.1.5紫外线照射对凤尾兰提取物抑菌效果的影响

3.1.6小结

3.2常规浸提提取工艺研究

3.2.1单因素试验

3.2.2提取工艺条件的优化

3.2.3验证实验

3.2.4小结

3.3微波提取工艺研究

3.3.1单因素试验

3.3.2提取工艺条件的优化

3.3.3验证最优化条件

3.3.4最优条件下对几种病原菌的抑制效果

3.3.5小结

3.4超声波提取工艺研究

3.4.1单因素试验

3.4.2提取工艺条件的优化

3.4.3小结

3.5凤尾兰提取物的安全性分析 急性毒性试验

3.6凤尾兰提取物在蒜薹保鲜中的应用

3.6.1凤尾兰提取物对蒜薹灰葡萄孢侵染的保护作用

3.6.2凤尾兰提取物对蒜薹灰葡萄孢侵染的治疗作用

3.6.3凤尾兰提取物对葱腐葡萄孢侵染的保护作用

3.6.4凤尾兰提取物对葱腐葡萄孢侵染的治疗作用

3.6.5小结

3.7凤尾兰提取物对柑桔腐烂的抑制效果

3.7.1不同浓度提取物处理对指状青霉致病性的影响

3.7.2不同浓度提取物浸泡对柑桔腐烂指数的影响

3.7.3小结

3.8凤尾兰抑菌成分的提取与初步分离鉴定

3.8.1各萃取物的抑菌活性

3.8.2柱层析过程

3.8.3活性成分的成分粗测

3.8.4小结

4讨论

4.1凤尾兰抑菌活性物质的稳定性

4.2不同提取方法的研究

4.3植物源抑菌活性物质的筛选方法

4.4抑菌成分的分离

4.5进一步研究的方向

5结论

参考文献

致 谢

附 录

攻读学位期间发表论文情况