异甘草素-β-环糊精包合物对Ⅱ型胶原蛋白诱导的类风湿性关节炎大鼠的影响

摘要

目的：研究异甘草素-β-环糊精包合物（isoliquiritigeninβ-cyclodextrin，ISL-β-CD Complex）对Ⅱ型胶原蛋白诱导的类风湿性关节炎（collagen-induced arthritis，CIA）模型大鼠体重增长、关节状况、关节炎指数评分，血清氧化指标、细胞因子水平，关节滑膜病理改变，关节滑膜细胞凋亡情况以及CyclinD1表达的影响。
　　研究方法：采用本实验室前期自提的羊Ⅱ型胶原蛋白溶液与等体积弗氏完全佐剂于冰上充分混合，4℃冰箱中过夜备用。取4周龄SD大鼠100只，按随机分组方法选出10只大鼠作为空白对照组，其余大鼠注射上述混合物并于7天时加强免疫，空白对照组以生理盐水注射。加强免疫后观察，根据关节炎指数评分选出符合条件的CIA大鼠，随机分为5组：模型对照组、雷公藤多甙片组（100mg·kg-1）和3个不同剂量的ISL-β-CD组（100mg·kg-1，400mg·kg-1，800mg·kg-1），每组10只。并于致炎后第8天开始给药，空白对照组和模型对照组给予等体积的生理盐水。于治疗给药前1天，给药第7，14，21，28天时测量体重和右后足趾体积。给药4周后麻醉大鼠，心脏取血，离心，收集血清，采用酶联免疫吸附（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）法测定血清中IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-4、IL-10的含量。取两侧膝关节滑膜，每组5只大鼠关节滑膜浸泡于4％的多聚甲醛中固定，脱水，透明，石蜡包埋，4um切片，采用DeadEnd Colorimetric TUNEL System试剂盒检测滑膜细胞凋亡情况，电镜、光镜检测滑膜细胞病理变化情况。每组另外五只大鼠取滑膜后液氮冷冻，提取组织蛋白，蛋白定量，western-blot检测滑膜组织中CyclinD1的表达情况。
　　结果：1、ISL-β-CD各剂量组大鼠体重明显增加（P＜0.05），关节肿胀程度减轻（P＜0.05），ISL-β-CD可以增加CIA模型大鼠体重，减轻其关节肿胀，降低AI分数；2、ISL-β-CD各剂量组大鼠血清SOD活性升高（P＜0.05），MDA含量降低（P＜0.05）， ISL-β-CD可以调节CIA模型大鼠血清中SOD和MDA水平；3、与模型对照组相比， ISL-β-CD各剂量组大鼠血清中IL-1β、TNF-α、IL-6的含量降低（P＜0.05），IL-4、IL-10的含量升高（P＜0.05），ISL-β-CD可调节促炎性细胞因子和抑炎性细胞因子的水平；4、光镜：雷公藤多苷片组和ISL-β-CD各剂量组大鼠关节滑膜病理情况与模型对照组相比得到明显改善。电镜：雷公藤多苷片组和ISL-β-CD各剂量组增生的滑膜细胞数量减少，滑膜细胞超微结构的病理损害降低；5、空白对照组大鼠关节滑膜细胞仅有少量凋亡，模型对照组大鼠关节滑膜细胞凋亡显著上升（P＜0.05），雷公藤多苷片组和ISL-β-CD各组关节滑膜细胞凋亡数目也明显增多，ISL-β-CD各剂量组与空白对照组、模型对照组和雷公藤多苷片组有统计学差异(P<0.05)。6、模型对照组大鼠滑膜组织中cyclinD1的表达明显高于空白对照组（P＜0.05），雷公藤多苷片组和ISL-β-CD组cyclinD1的表达同样高于空白对照组（P＜0.05），与模型对照组无统计学差异（P＞0.05），ISL-β-CD不能降低模型对照组大鼠关节滑膜中Cyclin D1的表达水平。
　　结论：1、ISL-β-CD可以降低CIA大鼠的炎症反应，明显降低其病理损害，对CIA大鼠有治疗作用；2、ISL-β-CD不能降低CIA模型大鼠关节滑膜中Cyclin D1的表达水平，推测ISL-β-CD通过作用于细胞周期的其他因子抑制细胞过度增殖。

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前 言

材料与方法

1、材料

2、实验方法

结 果

1、异甘草素-β-环糊精包合物对CIA大鼠外部情况的影响

2、异甘草素-β-环糊精包合物对CIA大鼠血清SOD、MDA的影响

3、异甘草素-β-环糊精包合物对CIA大鼠血清细胞因子的影响

4、异甘草素-β-环糊精包合物对CIA大鼠关节滑膜病理改变的影响

5、异甘草素-β-环糊精包合物对CIA大鼠关节滑膜细胞凋亡情况的影响

6、异甘草素-β-环糊精包合物对CIA大鼠关节滑膜cyclinD1表达的影响

讨 论

1、RA研究中动物模型应用

2、与RA相关的细胞因子

3、RA病程中滑膜细胞的超微结构变化

4、RA与细胞凋亡

5、RA与细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）

参考文献

综 述浅谈类风湿性关节炎

1、动物模型

2、与RA的发病机制相关的因素

3、RA的诊断检测

4、RA的药物治疗

参考文献

致谢

攻读学位期间发表的学术论文