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论文说明
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摘要
1.前言
1.1 β-内酰胺酶
1.1.1 β-内酰胺酶耐药机制
1.1.2 β-内酰胺酶的分类
1.1.3 超广谱β内酰胺酶的定义及类型
1.1.4 超广谱β内酰胺酶分布及流行
1.1.5 检测方法
1.2 产ESBL大肠杆菌的研究进展
1.2.1 院内环境与社区环境中的产ESBL大肠杆菌
1.2.2 畜牧养殖环境中的产ESBL大肠杆菌
1.3 基因的水平转移
1.3.1 细菌间耐药基因转移
1.3.2 细菌接合转移机制
1.3.3 ESBL基因的接合转移
1.4 蛋白质组学
1.4.1 蛋白质组学的功能与分类
1.4.2 蛋白质组学技术
1.4.3 差异蛋白质组学技术
2.材料和方法
2.1 实验材料
2.1.1 实验所用菌株
2.1.2 所用试剂盒
2.1.3 所用培养基
2.1.4 试剂的配制
2.1.5 仪器设备
2.2 试验方法
2.2.1 山东地区养猪环境中产ESBL大肠杆菌的流行情况及分子特点的研究
2.2.2 养殖环境中产ESBL大肠杆菌对土壤的污染情况研究
2.2.3 饲料添加剂膨润土对ESBL耐药基因CTX-M-15耐药基因传播中的作用研究
2.2.4 膨润土刺激下CTX-M-15耐药基因水平传播的差异蛋白质组研究
2.2.5 膨润土刺激条件下蛋白的转录水平及其作用研究
3.实验结果
3.1 山东地区养猪环境中产ESBL大肠杆菌的流行情况及分子特点的研究
3.1.1 产ESBL大肠杆菌阳性样品的流行情况
3.1.2 产ESBL大肠杆菌的流行情况
3.1.3 产ESBL大肠杆菌的耐药性
3.1.4 ESBL基因
3.2 养殖场中产ESBL大肠杆菌对土壤的影响
3.2.1 土壤和粪便中产ESBL大肠杆菌的分离
3.2.2 耐药表型
3.2.3 ESBL基因
3.2.4 复制子
3.2.5 同源性分析
3.3 饲料添加剂膨润土对ESBL耐药基因GTX-M-15耐药基因传播中的作用研究
3.3.1 接合菌株
3.3.2 接合实验的验证
3.3.3 膨润土存在条件下耐药基因的水平转移实验
3.3.4 膨润土促进CTX-M转移的条件的优化
3.4 膨润土刺激下CTX-M-15耐药基因水平传播的差异蛋白质组研究
3.4.1 双向电泳条件的摸索
3.4.2 膨润土存在条件下共培养菌株的双向电泳的图谱及差异蛋白分析
3.5 膨润土刺激下CTX-M-15水平传播蛋白的转录水平及其作用研究
3.5.1 引物特异性
3.5.2 膨润土刺激条件下基因转录水平差异表达
3.5.3 克隆载体的构建与验证
3.5.4 表达载体的构建与验证
3.5.5 不同蛋白对耐药基因水平传播的影响
4.讨论
4.1 山东地区产ESBL大肠杆菌的流行情况
4.2 农田中粪便的使用有利于产ESBL大肠杆菌向环境的传播
4.3 饲料添加剂膨润土对CTX-M-15基因转移的促进作用
4.4 膨润土作用条件下接合转移过程中细菌的比较蛋白质组学研究
4.5 通道蛋白及转运蛋白的转录水平研究及对接合转移的作用
5.结论
参考文献
附录
致谢
攻读学位期间发表论文情况