肉鸡呼吸道病致病因素调查与炎症因子的检测预警

摘要

近年来，随着肉鸡集约化、规模化养殖的快速发展，养殖密度的不断增加，多病因所致的肉鸡呼吸道病发病率越来越高，严重影响肉鸡的生长发育并导致较高的死亡率，威胁肉鸡养殖业的健康发展。研究肉鸡呼吸道病的致病因素、呼吸道的炎症反应、患病鸡体血清炎症因子及相关病原抗体的变化规律，对肉鸡呼吸道病的预警、诊断具有重要的指导意义。
　　肉鸡呼吸道病的最常见原因是禽流感、新城疫、鸡传染性支气管炎的单独或混合感染，上述疫病的共同特征是均表现呼吸道黏膜的急性炎症反应，并伴有不同程度的全身性感染。为了解肉鸡呼吸道病的病原因素、来源及患病鸡呼吸道黏膜炎症反应与血清炎症因子的内在联系，本研究对患病肉鸡群进行了2次跟踪采样。第一次从孵化厂采集210枚弱、死胚及鸡群的不同日龄(5d、12d、19d、26d、33d)病死鸡50只。第二次从孵化厂采集30枚弱、死胚及鸡群的不同日龄(5d、12d、19d、26d、33d)病死鸡75只。用RT-PCR方法对这两批样品进行了H9N2亚型禽流感病毒(H9N2AIV)、新城疫病毒(NDV)、传染性支气管炎病毒(IBV)感染状况检测;观察患病鸡呼吸道黏膜的眼观及镜检病变。结果表明，在鸡胚样品中能测到一定比例的H9N2 AIV、NDV和IBV，在不同日龄的病死鸡中也存在上述病原的感染，但未发现3种病毒共感染的现象。就其中分离到的一株传染性支气管炎病毒(IBV)进行了较为详尽的分型鉴定，该毒株基因型与H120疫苗株亲缘关系较远(78.1％)，与广为流行的LX4关系相近，但相似性仅有95.4％，说明该毒株为变异野毒株。由于种蛋卵黄中上述疫病的母源抗体水平较高，含鸡呼吸道病病毒的鸡胚在孵化过程未发生死亡，当雏鸡出壳后发育到一定时期（母源抗体衰竭后）所含病毒会大量复制，进而发生相应的呼吸道疾病，在鸡群中迅速传播，并继发其他细菌性疾病，造成鸡群大批死亡，这是肉鸡中后期呼吸道疾病日益严重的主要原因。病理学检查表明患病鸡呼吸道黏膜呈卡他性或出血性卡他性炎症。
　　为探讨患病鸡群血清炎症因子（白细胞介素1、白细胞介素6、白细胞介素8、肿瘤坏死因子α）及相关疾病（新城疫、流感）的抗体变化与呼吸道病发生的关联性，采用双抗体夹心ELISA方法、HA-HI试验对患病鸡群血清炎症因子及抗体水平实施动态监测，分析其变化与呼吸道病发生之间的内在联系。结果表明:血清炎症因子及抗体的变化趋势与呼吸道病发生规律密切相关。通过ELASA方法检测炎症因子的变化，操作简单，灵敏度高，能定量反映炎症变化的强毒，并且炎症因子变化的时间远早于临床表现、病理变化及血清抗体的产生，是判定呼吸道炎症反应的重要指标，对肉鸡呼吸道病的发生预警灵敏、准确。但其不足之处是:1）炎症因子的变化没有特异性，不能具体判定是何种病原导致的炎症反应;2）血清中的炎症因子是全身性炎症的综合表现，无法定位炎症部位。
　　血清抗体的动态检测能准确反映相关疫病的发生状况，肉鸡养殖过程中实施血清疫病(ND、AI)抗体及炎症因子联合动态监测对呼吸道病的判定是十分必要的，并能评价疫苗的免疫效果，而病死鸡呼吸道黏膜的病变观察则有助于进一步验证呼吸道病的发生，综合分析三者检测结果对疫情预警及疫病诊断、防控均具有重要的指导意义。
　　通过对5个舍的调查分析，肉鸡饲养过程中，舍内温度、湿度对呼吸道病的发生密切相关，规模化肉鸡场的舍内环境控制不能刻板的只依靠全自动温湿调控仪，还应依据疫病预警、养殖季节、鸡群表现等加以适时调整。

目录

声明

符号说明

摘要

1 引言

1．1 鸡呼吸道病概述

1．2 肉鸡呼吸道病的致病因素

1．2．1 特殊的解剖生理结构

1．2．2 环境因素

1．2．3 饲养管理因素

1．2．4 肉鸡呼吸道病的病原因素

1．3 炎症细胞因子

1．3．1 TNF-α

1．3．2 IL-1

1．3．3 IL-6

1．3．4 IL-8

1．4 肉鸡呼吸道病的防控措施

1．4．1 改善养殖环境

1．4．2 做好鸡苗的病原净化

1．4．3 加强卫生消毒

1．4．4 加强饲养管理

1．4．5 切实做好免疫及药物预防工作

1．4．6 积极治疗

1．5 研究意义

2 材料与方法

2．1 试验材料与地点

2．1．1 试验地点

2．1．2 主要仪器

2．1．3 主要试剂材料及试剂盒

2．1．4 主要试剂配制

2．2 方法及步骤

2．2．1 试验鸡场选择及病料收集

2．2．2 流行病学调查

2．2．3 病理学检查

2．2．4 血清抗体检测

2．2．5 IL-1、IL-6、IL-8及TNF-α含量检测

2．2．6 统计分析

2．2．7 病毒分离

2．2．8 病毒RNA的提取

2．2．9 聚合酶链式反应检测(PCR)

2．2．10 IB PCR产物回收及鉴定

3 结果与分析

3．1 呼吸道病致病因素的调查结果

3．1．1 鸡胚病原感染调查结果

3．1．2 病死鸡病原感染调查结果

3．1．3 环境因素调查结果

3．2 病理组织学检查

3．3 血清抗体检测结果

3．4 血清中IL-1、IL-6、IL-8及TNF-α含量检测结果

3．6 阳性质粒鉴定结果

3．6．1 同源性分析

4 讨论

5 结论

参考文献

致谢

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