枸杞多糖减轻高糖缺氧对血管内皮细胞损伤及其相关分子机制的初步探讨

摘要

目的: 枸杞多糖可以保护视神经细胞在缺血再灌注中免受损伤，但是对糖尿病脑缺血再灌注损伤中的作用还不明确，本研究探讨枸杞多糖是否可以降低高糖和缺氧条件下血管内皮细胞中血脑屏障相关因子的损伤。 方法: 体外培养脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）细胞，采用高糖和缺氧模拟糖尿病脑缺血再灌注损伤，进而观察枸杞多糖对血管内皮细胞的作用。首先验证高糖和缺氧对HUVEC细胞形态、增殖和血脑屏障相关因子（ZO-1、Occludin、MMP-9）的作用，HUVEC细胞分为正常糖组（NG control）、高糖组（HG control）、正常糖缺氧6h组（NG+OGD6h）、高糖缺氧6h组（HG+OGD6h）、正常糖缺氧6h复氧6h组（NG+OGD6h/R6h）、高糖缺氧6h复氧6h（HG+OGD6h/R6h）、正常糖缺氧6h复氧24h（NG+OGD6h/R24h）、高糖缺氧6h复氧24h组（HG+OGD6h/R24h）。枸杞多糖干预后，OGD6h/R6h时，检测HUVEC细胞形态、增殖和ZO-1、Occludin、MMP-9表达的改变，HUVEC细胞分为正常糖组（NG control）、正常糖缺氧6h复氧6h（NG+OGD6h/R6h）、正常糖缺氧6h复氧6h枸杞多糖干预组（LBP+NG+OGD6h/R24h）、高糖组（HG control）、高糖缺氧6h复氧6h组（HG+OGD6h/R6h）、高糖缺氧6h复氧6h枸杞多糖干预组（LBP+HG+OGD6h/R6h）。 结果: 当糖浓度为50 mmol\L时，与control组相比，细胞活性为72.33%±6.84%（P<0.01）；与control组相比，缺氧6h时，NG组和HG组细胞活性都降低（P<0.05）；与NG组相比，HG组细胞皱缩，细胞间距增宽；缺氧6h后，NG组和HG组细胞皱缩加剧；缺氧6h复氧6h后，细胞皱缩进一步增加；缺氧6h复氧24h后，细胞形态损伤减轻，但与缺氧前相比，细胞皱缩；缺氧前，HG组比NG组有更多的MMP-9的表达和较低的ZO-1和Occludin的表达（P<0.05）。与control组相比，在OGD6h和OGD6h/R6h 时，NG组和HG组中ZO-1和Occludin表达降低，并且在OGD6h/R6h时达到最低（P<0.01），随着复氧时间的增加，NG组和HG组中ZO-1和Occludin的表达增加；与之相反，与control相比，NG组和HG组在OGD6h时，MMP-9表达急剧升高（P<0.01），在OGD6h/R6h时表达开始降低（P<0.05）。LBP干预后，在OGD6h/R6h时，细胞活性升高（P<0.05），细胞皱缩程度减轻，HG组中，ZO-1、Occludin的表达升高（P<0.05），MMP-9的表达降低（P<0.05）。 结论: 1. 高糖和缺氧可能通过升高MMP-9活性来降低Occludin和ZO-1的表达从而导致HUVEC细胞的损伤。 2. 枸杞多糖可能通过降低高糖和缺氧条件下HUVEC细胞中MMP-9的活性来增加Occludin和ZO-1表达进而降低细胞损伤。

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前言

第一部分 高糖和缺氧对脐静脉内皮细胞（HUVEC）损伤作用及对ZO-1、Occludin、MMP-

前 言

材料与方法

1.主要试剂或仪器

2.实验方法

3.统计学方法

结果

1.脐静脉内皮细胞鉴别

2.细胞活性检测结果

3. 高糖和缺氧条件下，HUVEC细胞形态的改变

4.western blotting检测血脑屏障相关因子ZO-1、Occludin、MMP-9的表达

讨论

第二部分 枸杞多糖是否可以减缓高糖缺氧引起的HUVEC细胞损伤及ZO-1、Occludin、MMP

前言

材料与方法

1.主要试剂或仪器

2. 实验方法

3.统计学方法

结果

1.枸杞多糖（LBP）对HUVEC细胞损伤的检测结果

2.在高糖和缺氧条件下，枸杞多糖（LBP）干预后HUVEC细胞形态。

3.血脑屏障相关分子Occludin的检测结果

4.血脑屏障相关分子ZO-1的检测结果

5.血脑屏障相关分子MMP-9的检测结果

讨论

结论

参考文献

文献综述

综述参考文献

致谢

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