嵌合1a与1b亚型包膜蛋白基因HCV细胞培养模型的初步研究

摘要

目的：通过构建嵌合丙型肝炎病毒(HCV)1a与1b亚型包膜蛋白基因的质粒，建立嵌合型HCV的体外细胞培养模型，为针对中国HCV主要基因型的抗病毒药物筛选和HCV抗原免疫效果评价提供有效模型。 方法：1．运用融合PCR技术，通过酶切、重组等手段将中国HCV HeBei分离株(1b)和H77株(1a)的全长包膜蛋白基因(E1/E2)引入JFH1株(2a)基因骨架，构建包膜蛋白基因区相互置换的嵌合病毒(1b/2a和1a/2a)全长基因组质粒；2．HCV(1b/2a)和HCV(1a/2a)全长基因组质粒经Xbal单酶切线性化后体外转录获得全长病毒RNA，将RNA转染Huh7.5.1细胞，进行间接免疫荧光、蛋白印迹实验检测。 结果：1．成功构建了含嵌合病毒1b/2a、1a/2a全长基因组的重组质粒pHe-Bei(E1E2)/JFH1和pH77(E1E2)/JFH1；2．分别以pHeBei(E1E2)/JFH1和pH77(E1E2)/JFH1为模板，体外转录获得病毒RNA，将RNA转染人肝癌细胞Huh7.5.1细胞，间接免疫荧光法检测72h后转染阳性细胞率为1％～3％，5d后阳性细胞率为20％～50％；Western blot检测到细胞内HCV非结构蛋白NS3和结构蛋白Gore的表达。 结论：本研究首次在国内建立了嵌合中国HCV分离株(HeBei株)基因的HCV细胞培养模型，病毒RNA可在培养细胞中复制和表达，产生嵌合HCV，嵌合型HCV可以在细胞间传播。

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前言

1.实验材料和方法

2.结果

3.讨论

4.结论

5.参考文献

文献综述 丙型肝炎病毒细胞培养系统的发展及其应用

攻读学位期间发表文章情况

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