基于高通量技术的蒙医未熟热、成熟热证期蛋白质组学标志物与变证机制的研究

摘要

目的：
　　1.采用高通量质谱检测技术筛选蒙医未熟热证期和成熟热证期差异表达蛋白，分析其在疾病转变过程中的功能机制、作用，初步为蒙医发热分期、分型提供“生物学依据”。
　　2.基于蛋白质组学的蒙医温病未熟热、成熟热证期变证机制的探讨和试述。
　　方法：
　　采集符合标准的腮肿病组、流行性感冒组和麻疹病组等三组疾病蒙医未熟热、成熟热二证期静脉血5ml，离心、去除血细胞、分离血浆；对血浆样品进行56℃高温灭活处理；采用AKTA蛋白纯化仪去除20余种高丰度蛋白；使用BCA定量试剂盒及10-20％SDS-PAGE梯度凝胶电泳进行定量和质量检测；再对待测样品进行蛋白TMT10标记后，注入C18色谱柱，采用高通量质谱检测技术对其进行蛋白质组学检测，测定二证期蛋白含量，筛选二证期差异表达蛋白，寻找辩证诊断指标和特异性标志物。
　　结果：
　　质谱检测结果显示，共检测出1500种蛋白，检测多肽次数为41632，检测多肽种类数为7619，其中在二证期有差异表达的共1323个，差异表达1.3倍以上共1077个，成熟热和未熟热证期与正常组比较共同上调和下调的共164个（其中上调95个，下调69个），其中三组疾病在二证期同时上调和下调且差异1.3倍以上的共有8个。分别为范可尼贫血组蛋白D2亚型X2（Fanconi anemia, complementation group D2）、核酸内切酶结构域蛋白1前体（endonuclease domain containing1）、细胞周期蛋白依赖性激酶5激活因子2（cyclin-dependent kinase5 regulatory subunit2）、DnaJ-Hsp40同源物亚家族C成员4（DnaJ homolog,subfamily C member4）、泛素羧基末端水解酶24亚型X1（PREDICTED:ubiquitin carboxyl-terminal hydrolase24 isoform X1）、布雷菲德菌素A抑制性鸟嘌呤核苷酸交换因子3亚型X1（PREDICTED:brefeldin A-inhibited guanine nucleotide-exchange protein3isoform X1）、NMDA2D离子型谷氨酸受体前体（glutamate receptor ionotropic,NMDA2D precursor）、配体依赖性辅助依赖因子亚型X1(PREDICTED:ligand-dependent corepressor isoformX1)等。其中上调6个，下调2个。
　　结论：
　　1.蒙医未熟热至成熟热证期的演变过程中共出现8个蛋白的差异表达，其中上调6个，下调2个。
　　2.推测上调的6个蛋白与“希拉”等制热性因素有关，下调的2个蛋白与“赫依”、“巴达干”等寒性因素有关。
　　3.三种疾病在蒙医未熟热至成熟热证期的演变过程中差异表达的8个蛋白可能具有“证期标志物”和诊断意义，有着进一步研究价值。

目录

前言

1 实验材料

1.1 实验样品

1.2病例纳入、排除、剔除标准

1.3 病例诊断标准

1.4 蒙医未熟热、成熟热证期诊断标准

1.5 主要试剂

1.6 主要仪器设备

2 实验方法

2.1 样品处理

2.2 血浆去除高丰度蛋白

2.3 样品浓缩和置换

2.4 样品质量检测

2.5 蛋白酶切

2.7 C18 色谱柱样品分级

2.8 质谱相对定量检测

3. 数据分析

3.1 选择数据库

3.2 选择软件和设置计算、过滤参数

4 实验结果

5.讨论

6.结论

参考文献

综述:蒙医温病学治病机理研究现状

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