辛伐他汀通过SPAG9/JNK等信号通路对卵巢癌及子宫内膜癌上皮间质转化作用研究

摘要

女性生殖器肿瘤可分为良性、交界性（卵巢）及恶性，发生于女性生殖系统的各个部位，但以子宫和卵巢的肿瘤最为常见，是危害妇女身心健康的常见疾病。常见的恶性肿瘤有宫颈癌、子宫内膜癌和卵巢癌，其中死亡率最高的是卵巢上皮性癌。主要的治疗方法有手术、放疗、化疗、免疫及综合治疗。有效的预防措施可明显降低妇科肿瘤的发病。肥胖是多种癌症发生的重要危险因素，其作用机制的研究结果尚不明晰，研究肿瘤与脂代谢的相互影响，探究两者间的关系，寻找肿瘤的其他治疗途径，以期减少癌症的发生、发展，提高癌症患者预后和生活质量。
　　第一部分 辛伐他汀对TGF-β诱导的卵巢癌细胞上皮间质转化EMT的影响
　　目的：
　　探讨辛伐他汀对TGF-β诱导的卵巢癌细胞上皮间质转化EMT的影响，并进一步研究可能的机制。
　　方法：
　　采用两种卵巢癌细胞系，Skvo3和A2780进行实验;采用CCK-8试验检测不同浓度辛伐他汀及TGF-β对卵巢癌细胞增殖的影响并根据浓度结果将细胞分为对照组、辛伐他汀组、TGF-β组、辛伐他汀+TGF-β组，检测各组细胞增殖的变化;采用划痕实验分析各组卵巢癌细胞的迁移能力，采用Transwell侵袭实验分析各组卵巢癌细胞的侵袭能力;采用Western blotting蛋白印迹法测定各组卵巢癌细胞EMT及信号通路的变化。
　　结果：
　　在Skvo3细胞和A2780细胞中，辛伐他汀减少细胞增殖及TGF-β促进的细胞增殖，降低细胞迁移和侵袭及TGF-β诱导的细胞迁移和侵袭的增加，并逆转两种细胞的EMT及TGF-β诱导的EMT。进一步研究结果显示，辛伐他汀可降低两种细胞中精子相关抗原9(Sperm associated antigen SPAG9)/c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase JNK)通路的表达，而TGF-β促进SPAG9/JNK通路的表达增加，且辛伐他汀减弱TGF-β对此通路的促进作用。
　　结论：
　　辛伐他汀减少TGF-β诱导的卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭和EMT，可能是通过调节SPAG9/JNK信号通路来发挥此作用。我们的研究显示辛伐他汀在卵巢癌细胞株可发挥抗增殖和抗转移的作用，并进一步分析了此作用与TGFβ及SPAG9/JNK之间的关系。本实验增强辛伐他汀治疗卵巢癌的潜在利益，为其抗肿瘤作用机制提供了新见解，提示他汀类药物可能成为卵巢癌的一种有前景的治疗策略。
　　第二部分 辛伐他汀在子宫内膜癌中通过SPAG9/JNK通路和ROCK/Par3通路抑制17β-雌二醇诱导的上皮间质转化
　　目的：
　　探讨辛伐他汀对17β-雌二醇诱导的子宫内膜癌上皮间质转化(EMT)的影响，并进一步探讨其作用机制。
　　方法：
　　采用两种子宫内膜腺癌细胞系，Ishikawa细胞和KLE细胞，采用CCK-8试验检测不同浓度辛伐他汀和17β-雌二醇对卵巢癌细胞增殖的影响，并根据浓度结果将细胞分为对照组、辛伐他汀组、17β-雌二醇、辛伐他汀+17β-雌二醇、辛伐他汀+雌激素受体抑制剂(ICI182，780)组，检测各组子宫内膜癌细胞增殖的变化。采用划痕实验分析各组子宫内膜癌细胞的迁移能力，采用Transwell侵袭实验分析各组子宫内膜癌细胞的侵袭能力;采用Western blotting蛋白印迹法测定各组子宫内膜癌细胞的EMT，精子相关抗原9(SPAG9)/Jun N端激酶(JNK)和Rho相关激酶(ROCK)/极性复合蛋白3(Par3)信号通路的变化。
　　结果：
　　在Ishikawa细胞和KLE细胞，辛伐他汀减少细胞增殖及17β-雌二醇促进的细胞增殖，降低细胞迁移和侵袭及17β-雌二醇诱导的细胞迁移和侵袭的增加，并逆转两种细胞的EMT及17β-雌二醇诱导的EMT。此外，仅在Ishikawa细胞中，ICI182，780（特异性雌激素受体抑制剂）部分消除辛伐他汀的抑制作用。进一步研究结果显示，辛伐他汀可降低两种细胞中SPAG9/JNK通路的表达，而17β-雌二醇促进SPAG9/JNK通路的表达增加，且辛伐他汀减弱17β-雌二醇对此通路的促进作用。另外，在Ishikawa和KLE细胞中，辛伐他汀降低了ROCK表达而增加了Par3的表达，17β-雌二醇增加了ROCK的表达而降低了Par3的表达，且辛伐他汀减弱17β-雌二醇对此通路的作用。此外，ICI182，780仅在Ishikawa细胞中发挥出部分消除辛伐他汀对信号通路的抑制作用。
　　结论：
　　辛伐他汀可能通过调节SPAG9/JNK信号通路及ROCK/Par3信号途径，阻断子宫内膜腺癌细胞中17β-雌二醇诱导的细胞增殖、迁移、侵袭和EMT。使用雌激素受体抑制剂后辛伐他汀的作用只在雌激素受体阳性的细胞中部分消除。我们的研究为辛伐他汀抗肿瘤作用机制提供了新的观点，表明他汀类药物可能是治疗晚期子宫内膜癌的一种有前景的治疗策略。

目录

声明

摘要

符号说明

前言

第二部分 辛伐他汀在子宫内膜癌中通过SPAG9／JNK和ROCK／Par3通路抑制17β-雌二醇诱导的上皮间质转化

材料与方法

1 实验材料

2 实验方法

3 统计学分析

结果

第二部分 辛伐他汀在子宫内膜癌中通过SPAG9／JNK和ROCK／Par3通路抑制17 β-雌二醇诱导的上皮间质转化

讨论

第二部分 辛伐他汀在子宫内膜癌中通过SPAG9／JNK和ROCK／Par3通路抑制17 β-雌二醇诱导的上皮间质转化

结论

第二部分 辛伐他汀在子宫内膜癌中通过SPAG9／JNK和ROCK／Par3通路抑制17 β-雌二醇诱导的上皮间质转化

附图

参考文献

致谢

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