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摘要
缩写词表
第一章研究背景
1．1纤维素的开发和利用
1．2纤维素的微生物降解
1．2．1纤维素降解真菌
1．2．2纤维素降解细菌
1．3纤维素酶
1．4纤维素降解机制
1．4．1游离纤维素酶协同机制
1．4．2纤维小体降解机制
1．4．3第三种降解机制
1．5 Ⅸ型分泌系统
1．6 DegQ
1．6．1原核生物中htrA的功能
1．6．2真核生物中htrA的功能
1．6．3 htrA的生物信息学分析
1．7 Tol-Pal system
1．7．1 Tol-Pal系统的结构和功能
1．7．2 Pal的结构和功能
1．7．3外膜囊泡(OMVs)
1．8 Cytophaga hutchinsonii研究背景
1．8．1 Cytophaga hutchinsonii的分类学地位及特征
1．8．2 Cytophagahutchinsonii的研究进展
1．9论文立题和工作思路
第二章热激蛋白ChuDegQ的性质研究
2．1材料和方法
2．1．1菌种与质粒
2．1．2实验中用到的引物
2．1．3主要试剂和仪器
2．1．4培养条件
2．1．5分子生物学反应体系及操作
2．1．6 E．coli感受态的制备及热激转化
2．1．7蛋白序列分析
2．1．8目的蛋白的诱导表达和纯化
2．1．9 SDS-PAGE凝胶电泳
2．1．10蛋白酶活力测定
2．1．11类伴侣活力的测定
2．1．12复性MalS能力的测定
2．1．13 Lysozyme活力的测定
2．1．14周质空间蛋白的提取方法
2．1．15外膜蛋白的提取方法·
2．1．16 Size-Exclusion Chromatography(SEC)
2．1．17 LC／MS-MS实验流程和数据分析
2．2实验结果
2．2．1 C．hutchinsonii ChuDegQ的序列分析
2．2．2 ChuDegQ的异源表达和纯化
2．2．3 ChuDegQ的基本性质
2．2．4 ChuDegQ识别底物的特点
2．2．5 ChuDegQ聚合状态的变化
2．2．6三聚体和笼形结构的酶活力和分子伴侣功能比较
2．2．7 ChuDegQ与EcDegQ和EcDegP酶活力的比较
2．2．8 ChuDegQ在Chutchinsonii中的底物
2．3讨论
2．3．1 ChuDegQ是一个htrA家族蛋白
2．3．2不同聚集状态下的ChuDegQ的蛋白酶活力和伴侣活力
2．3．3 ChuDegQ的模型图
第三章C．hutchinsonii肽聚糖相关脂蛋白的功能研究
3．1材料和方法
3．1．1菌种和质粒
3．1．2实验中用到的引物
3．1．3主要试剂和仪器
3．1．4培养条件
3．1．5分子生物学反应体系及操作
3．1．6 E．coli感受态的制备及热激转化
3．1．8再生无定形纤维素(RAC)的制备
3．1．9 C．hutchinsonii生长曲线的测定
3．1．10纤维素利用率的测定
3．1．11 XRD测定纤维素粉的结晶度
3．1．12滤纸降解实验
3．1．13扫描电子显微镜(SEM)的使用
3．1．14纤维素酶活测定
3．1．15药敏实验
3．1．16囊泡的定量
3．1．17蛋白定位
3．1．18生物信息学分析
3．2结果
3．2．1 C．hutchinsonii peptidoglycan-associated iipoprotein(Pal)生物信息学分析
3．2．2 C．hutchinsonii pal突变株的表型研究
3．2．3 pal的敲除影响C．hutchhzsonii降解纤维素结晶区
3．2．4 pal的敲除影响C．hutchinsonii外膜完整性
3．2．5 CHU_3220的定位
3．3讨论
第四章C．hutchinsonii未知功能蛋白基因Hp_4的研究
4．1材料与方法
4．1．1菌种与质粒
4．1．2实验中用到的引物
4．1．3主要试剂和仪器
4．1．4培养条件
4．1．5分子生物学反应体系及操作
4．1．12 C．hutchinsonii外膜蛋白的提取
4．1．13外膜吸附蛋白的提取
4．2实验结果
4．2．2 C．hutchinsonii Hp_4突变株的表型研究
4．2．3 Hp_1-Hp_4基因簇的分析
4．3讨论
全文总结及展望
附录
参考文献
在读期间发表学术论文
致谢
