探讨胆管癌上皮间质转化过程中Wnt/β-catenin通路与TGFβ1-Smad信号转导通路之间的关系

摘要

目的：通过检测Wnt2b抑制后胆管癌细胞上皮间质转化过程中TGFβ1-Smad信号途径相关因子的变化，对胆管癌细胞上皮间质转化过程中Wnt/β-catenin信号通路与TGFβ1-Smad信号通路之间的轴连关系进行初步探讨。
　　方法：分别用设计出的3种（pLVT1402、pLVT1403及pLVT1404）Wnt2b-siRNA慢病毒载体、3种（pLVT1399、pLVT1400及pLVT1401）β-catenin-siRNA慢病毒载体以及空白慢病毒载体转染人胆管癌细胞RBE细胞系，RT-PCR法检测Wnt2b和β-catenin表达，筛选出Wnt2b表达水平最低的Wnt2b-siRNA-RBE细胞组、β-catenin表达水平最低的β-catenin-siRNA-RBE细胞组，并以空白慢病毒载体转染的RBE细胞作为阴性对照组。分别用RT-PCR和Western Blot法测定各组中E-cadherin、Vimentin、TGFβ1、smad4、snail及slug的表达。
　　结果：与阴性对照组、pLVT1403组及pLVT1404组相比，pLVT1402组RBE细胞中Wnt2b的表达水平最低（P＜0.05）；与阴性对照组、pLVT1400组及pLVT1401组相比，pLVT1399组RBE细胞中β-catenin的表达水平最低（P＜0.05）；与阴性对照组相比，筛选出的Wnt2b-siRNA-RBE细胞组、β-catenin-siRNA-RBE细胞组中，E-cadherin表达上升而Vimentin表达下降（P＜0.05）。Wnt2b-siRNA-RBE细胞组与β-catenin-siRNA-RBE细胞组及阴性对照组相比，TGFβ1、smad4、snail及slug的表达下降（P＜0.05），而β-catenin-siRNA-RBE细胞组与阴性对照组之间比较上述四种因子的表达水平无统计学差异（P＞0.05）。
　　结论：抑制RBE细胞中Wnt2b或β-catenin的表达后，细胞中E-cadherin表达上升而Vimentin表达下降，证明Wnt2b或β-catenin的低表达能够抑制RBE细胞的EMT过程。Wnt2b低表达后TGFβ1-Smad通路中相关因子均降低，说明Wnt2b除能通过Wnt/β-catenin信号途径诱导胆管癌细胞发生EMT外，也可经TGFβ1-Smad信号途径发挥此效应，Wnt/β-catenin通路与TGFβ1-Smad通路之间存在轴连关系。

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引言

第一章 实验材料

1.1 胆管癌细胞

1.2 重要仪器、设备

1.3主要试剂及试剂盒

第二章 实验方法

2.1 细胞培养

2.2 实验细胞的构建

2.3 RT-PCR法检测各组RBE细胞中E-Cadherin、Vimentin、TGFβ1、Smad4、Slug及Snail的表达

2.4 Western Blot法检测RBE细胞中E-Cadherin、Vimentin、TGFβ1、Smad4、Slug及Snail的表达

2.5 统计学方法

第三章 实验结果

3.1 RT-PCR分别检测3种Wnt2b-siRNA和3种β-catenin-siRNA对RBE细胞 Wnt2b和β-catenin表达的干扰效果

3.2 RT-PCR法检测各组细胞中E-cadherin、Vimentin、TGFβ1、smad4、snail及slug的表达

3.3 Western Blot法检测各组E-cadherin、Vimentin、TGFβ1、smad4、snail及slug的表达

第四章 讨论

第五章 结论

参考文献

文献综述: 上皮间质转化（EMT）在胆管癌中作用的研究进展

攻读学位期间的研究成果

致谢

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