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四种中药单体作为疫苗佐剂的体外筛选及原花青素作为肿瘤细胞疫苗佐剂在小鼠黑色素瘤模型中的应用

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引言

第一章材料与仪器

1. 1实验动物和细胞

1.2药物和试剂

1.3主要实验溶液及配制方法

1.4仪器和设备

第二章实验方法

2.1细胞培养

2.1.1细胞复苏

2.1.2细胞传代

2.1.3细胞冻存

2.2四种中药单体对抗原提呈细胞的免疫激活作用

2.2.1 药物处理及实验分组

2.2.2 四种中药单体对抗原提呈细胞免疫刺激活性的检测

2.3 原花青素作为肿瘤细胞疫苗佐剂在小鼠黑色素瘤模型中的应用

2.3.1抗原制备

2.3.2 实验动物分组及免疫流程

2.3.3小鼠黑色素瘤模型的建立

2.3.4小鼠脾脏淋巴细胞的分离

2.3.5 T细胞増殖活力检测

2. 3. 6 荷瘤小鼠脾脏淋巴细胞CTL水平检测

2.3.7 流式细胞术检测细胞因子的表达水平

2.4 统计学分析

第三章实验结果

3.1四种中药单体对抗原提呈细胞的免疫激活作用

3.1.1原花青素对抗原提呈细胞的免疫刺激活性

3.1.2天麻素对抗原提呈细胞的免疫刺激活性

3.1.3黄芩素对抗原提呈细胞的免疫刺激活性

3.1.4芹菜素对抗原提呈细胞的免疫刺激活性

3.1.5原花青素在细胞水平具有较强的免疫刺激活性

3.2 原花青素作为疫苗佐剂对小鼠体内抗原提呈细胞的免疫激活作用

3.3 原花青素作为疫苗佐剂对小鼠皮下黑色素瘤的抑制作用

3.4 原花青素作为疫苗佐剂对荷瘤小鼠产生的免疫作用

3.5 原花青素作为疫苗佐剂对小鼠功能性T细胞的诱导作用

3. 6 原花青素作为疫苗佐剂对小鼠CTL功能的诱导作用

第四章讨论

第五章结论

参考文献

文献综述:肿瘤免疫治疗进展

攻读学位期间研究成果

缩略词表

致谢

声明

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摘要

目的:检测原花青素、天麻素、黄芩素和芹菜素对抗原提呈细胞RAW264.7和DC2.4的免疫刺激活性,并将免疫刺激活性最好的原花青素作为肿瘤细胞疫苗佐剂在小鼠皮下黑色素瘤模型中进行抗肿瘤研究,为肿瘤疫苗的研发提供一种新型可供选择的佐剂。
  方法:体外实验以不同种类、不同浓度的中药单体分别刺激RAW264.7和DC2.4细胞,48 h后用抗体染色,流式细胞术检测两种抗原提呈细胞表面激活标志CD80,CD86,MHCI,MHC II分子表达量变化;动物实验以紫外灭活的小鼠黑色素瘤细胞B16F10作为抗原,将肿瘤抗原与原花青素充分混合作为肿瘤细胞疫苗,采用肌肉注射的方式免疫荷瘤C57BL/6小鼠。
  结果:体外实验结果显示不同种类、不同浓度的中药单体分别刺激RAW264.7和DC2.4细胞后,两种抗原提呈细胞表面CD80,CD86,MHCI,MHCII分子不同程度表达上调,原花青素具有较强的免疫刺激活性;动物实验结果显示原花青素能够增强小鼠体内DC的激活,原花青素作为肿瘤细胞疫苗佐剂免疫的荷瘤小鼠肿瘤生长速度减慢并且生存期延长,肿瘤细胞疫苗能够诱导小鼠产生高水平针对B16F10抗原的特异性的细胞杀伤,并且能够激活小鼠体内分泌高水平perforin、IFN-年和TNF-a的CD8+T细胞;结果表明原花青素作为肿瘤细胞疫苗佐剂在小鼠黑色素瘤模型中能够诱导一定的抗肿瘤效果。
  结论:原花青素是一种具有潜在应用价值的肿瘤细胞疫苗佐剂,本研宄为原花青素作为疫苗佐剂的进一步应用提供了理论基础。

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