牛支原体分离鉴定、药敏试验及耐喹诺酮类药基因的检测

摘要

本研究在从宁夏地区分离鉴定3株牛支原体的基础上，结合实验室已有资源，对牛支原体最适培养基进行了筛选、并对分离株进行了药敏试验和耐药基因的检测，为我国牛支原体病灭活疫苗研究和药物防治技术研究提供了理论依据，研究内容有：
　　 1.从宁夏固原某牛场犊牛肺炎病例中分离鉴定到3株支原体，经分离培养、形态观察、生化试验、PCR鉴定、16S rRNA基因序列分析及犊牛回归试验，鉴定为牛支原体，表明牛支原体已在宁夏地区出现。
　　 2.比较了牛支原体在改良Thiaucourt's培养基、牛心汤培养基和改良KM2培养基中生长曲线，结果发现，牛支原体在改良Thiaucourt's培养基中的生长30 h即可达到平台期，平均最高生长滴度达7.0×109 ccu/ml，表明牛支原体在改良Thiaucourt's培养基中生长快、滴度高，为下一步牛支原体灭活疫苗研究提供了参考依据。
　　 3.选用了临床常用的几种抗菌药物对8株牛支原体分离株进行药敏试验，结果表明，8株牛支原体对泰乐菌素、延胡索酸泰妙菌素和替米考星有很高的敏感性(MIC值分别是3.33μg/ml、0.33μg/ml及2.67μg/ml)，对四环素和红霉素中度敏感(MIC值分别是0.83μg/ml及10.7μg/ml)，对林可霉素、氟苯尼考和氟喹诺酮类药物呈现不同程度的耐药性(MIC值分别是0.33μg/ml、3.33μg/ml及0.33μg/ml)。结果为指导临床用药治疗牛支原体感染提供了实验数据支持。
　　 4.对牛支原体分离株喹诺酮抗性基因进行了序列分析，包括DNA回旋酶编码基因gyrA、gyrB和拓扑异构酶Ⅳ编码基因parC、parE。结果显示，在gyrA的QRDR共有1处氨基酸发生改变，在gyrB的QRDR共有6处氨基酸发生改变，耐FQs牛支原体分离株parC基因中只发现1处突变致FQs耐药决定区氨基酸改变，parE基因中只发现2处突氨基酸改变。本研究中临床分离牛支原体对8种FQs呈现不同的耐药程度，而且gyrA、gyrB、parC和parE的QRDR均发生了氨基酸残基的改变，说明牛支原体对FQs产生耐药性的分子机制可能是FQs的作用靶位发生改变所致。
　　 研究结果表明：通过分离鉴定将三株菌体初步确定为支原体。经过PCR扩增、16SrRNA基因序列分析以及动物回归试验，确定为牛支原体；牛支原体在改良Thiaucourt's培养基中生长快、滴度高；牛支原体的延胡索酸泰妙菌素、土霉素类药物对于试验菌株都有很好的疗效；牛支原体对FQs产生耐药性的分子机制可能是FQs的作用靶位发生改变所致。这为为下一步牛支原体灭活疫苗的研究提供了参考依据。

目录

文摘

英文文摘

课题来源

英文缩略表

前 言

第一章 引言

1.1 牛支原体的流行概况

1.2 实验室诊断

第二章 牛支原体宁夏地区分离株的分离鉴定及其16S RRNA基因特征

2.1 材料

2.2 方法

2.3 结果

2.4 讨论

2.5 小结

第三章 牛支原体生长曲线的测定和培养基的筛选

3.1 材料

3.2 方法

3.3 结果

3.4 讨论

3.5 小结

第四章 牛支原体药敏试验

4.1 材料

4.2 实验方法

4.3 结果

4.4 讨论

4.5 小结

第五章 氟喹诺酮类药物耐药基因检测

5.1 材料

5.2 方法

5.3 结果

5.4 讨论

5.4 小结

全文结论

参考文献

致谢

作者简介

附 录