DNA甲基化转移酶1(DNMT1)在胰腺癌中表达及意义

摘要

胰腺癌为恶性程度极高的消化系肿瘤,发病率在世界范围和我国都呈逐年上升趋势。胰腺癌恶性程度高,症状隐匿,出现典型临床表现时已难以治疗,目前缺乏临床上缺乏早期诊断的手段。进一步研究胰腺癌的发病机制,寻找疾病早期诊断的指标,已经成为提高胰腺癌治疗效果的关键问题。在癌症的发病机制的研究中,逐步而有序的基因改变引发的癌基因激活和肿瘤抑制基因的失活被认为是人类癌症发病重要的分子生物学机制。但是,随着对癌症本身复杂的生物学行为研究的深入,单纯的基因改变并不能完全的解释肿瘤发病的全部过程,表观遗传的基因修饰可能对基因表达有重要的影响。DNA甲基化是表观遗传学重要的研究内容,DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase 1)是首先被克隆的DNA甲基化转移酶,目前认为DNMT1的作用是维持CpG岛甲基化,以及与人类癌症中肿瘤抑制基因异常沉默相关。
　　 本实验运用免疫组织化学法和western blot法,结合完整的临床资料,对胰腺癌及其癌旁胰腺组织中DNMT1的表达情况进行研究,并分析DNMT1与临床病理因素的关系,以探讨它在胰腺癌中的表达及意义。
　　 材料与方法：
　　 一、材料
　　 47例胰腺癌及22例癌旁组织均来自中国医科大学附属第一医院2004～2009年手术切除存档蜡块。组织均经10％福尔马林固定,常规石蜡包埋,切成4μm厚连续切片备免疫组织化学和病理分析用。9例胰腺癌及其癌旁组织来自中国医科大学附属第一临床医院胃肠胰外科2008年～2010年手术切除标本。术中切除后立即从原发肿瘤及周围癌旁胰腺组织中取直径约0.5cm组织块放置于EP管中,-70℃冰箱保存备用。
　　 二、方法
　　 (一)免疫组织化学染色:
　　 检测DNMT1表达采用链酶亲和素.生物素.过氧化物酶免疫组化法(sabc法)。结果判定:DNMT1蛋白表达定位于细胞核,光镜下每张切片选择5个高倍视野,每高倍视野计数100个瘤细胞,细核中染色黄色或淡黄色为阳性,显微镜下观察细胞染色比率,大于50％为阳性,小于50％为阴性。
　　 (二)Western blot:
　　 检测DNMT1在癌旁胰腺组织和胰腺癌中的表达。取新鲜样品(100毫克)加5倍裂解缓冲液,剪碎、超声匀浆处理,高速低温离心提取上清蛋白,电泳,转印,经封闭后加相应的一抗、二抗及显色试剂检测。实验结果用Quantity One电泳凝胶分析软件测定灰度值作为定量指标,来判断DNMT1蛋白相对含量。
　　 三、统计学分析
　　 采用SPSS for windows 13.0软件,对DNMT1表达与临床病理特征的关系采用x2检验。将免疫印记结果的灰度值行配对t检验。P<0.05有显著意义。
　　 结果：
　　 一.DNMT1在正常胰腺组织和胰腺癌组织中的表达
　　 Western Blot结果显示:DNMT1在胰腺癌和癌旁组织中有不同程度的表达,在胰腺癌组织中的表达明显高于相应的癌旁组织。
　　 二.DNMT1的表达与胰腺癌的临床病理因素的关系
　　 胰腺癌中,DNMT1阳性率为70.2％(33/47),其表达与肿瘤的临床分期,分化程度和淋巴结转移(P<0.05)相关,与年龄,性别无关(P>0.05)。
　　 结论：
　　 一.DNMT1在胰腺癌组织中的表达高于癌旁组织。
　　 二.胰腺癌中,DNMT1表达与肿瘤的临床分期,分化程度和淋巴结转移相关,与年龄,性别无关。

目录

文摘

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前言

材料和方法

实验结果(附图表)

讨论

结论

本研究创新的自我评价

参考文献

综述(含参考文献)

参考文献

致谢

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