顺序注射光度分析联用技术测定α--淀粉酶活性和磷形态的研究

摘要

本文将顺序注射分析系统和分光光度检测技术联用，用于α-淀粉酶活性的测定和不同形态磷的分析，获得了比较满意的结果。
　　论文的第一部分介绍了酶的发展历史、酶的分类、淀粉酶、影响酶反应的因素、α-淀粉酶的用途，对包括分光光度法、荧光分析法、生物传感器法、毛细管电泳法和流动注射分析联用技术在内的测定α-淀粉酶活性的分析方法的最新进展，进行了较为详细的介绍。
　　论文的第二部分建立了顺序注射光度分析联用技术测定α-淀粉酶活性的方法。淀粉遇碘形成蓝色络合物，在适宜的条件下，α-淀粉酶催化淀粉分子水解，依据水解前后蓝色络合物吸光度的变化定量测定了α-淀粉酶活性。在最佳实验条件下，该方法的线性响应范围为74-555 U/L，对370 U/L的α-淀粉酶进行11次连续测定的相对标准偏差(RSD)为1.2％，检出限为16.7 U/L，采样频率为50样/小时。测定了人尿液和唾液中α-淀粉酶的活性，回收率在98.5％-110％之间。该方法简便、快速、灵敏，已成功地用于压力响应过程的检测。
　　论文的第三部分研究了一种顺序注射在线微柱浸提光度分析测定土壤中不同形态磷的新方法。该系统包括磷的动态提取和在线检测两部分。利用顺序注射的前处理技术使用0.25 mol/L H2SO4和0.5 mol/L NaHCO3实现了土壤中相应结合态磷的在线浸提，基于磷钼蓝光度法测定了磷。与传统的手工法相比，该方法大大节省了浸提剂和反应试剂用量，明显缩短了提取时间。方法的线性范围在0.1-6 mg/L之间，检出限为0.03 mg/L，对3.5 mg/L的磷进行13次平行测定，其相对标准偏差为0.8％。该法成功地应用于土壤中不同形态磷的提取与测定，测定结果与手工法结果比较，二者测定结果一致。
　　论文的第四部分对实验内容进行了总结，并对顺序注射光度分析联用技术的应用前景进行了展望。

目录

声明

摘要

第一章 概述

1．1 酶的发展历史

1．2 酶的分类

1．3 淀粉酶

1．4 影响酶反应的因素

1．4．1 底物浓度对酶反应的影响

1．4．2 pH对酶反应的影响

1．4．3 温度对酶反应的影响

1．4．4 激活剂和抑制剂对酶反应的影响

1．5 α-淀粉酶的用途

1．5．1 α-淀粉酶的工业应用

1．5．2 α-淀粉酶的临床应用

1．6 α-淀粉酶活性的测定方法

1．6．1 分光光度法

1．6．2 荧光分析法

1．6．3 生物传感器法

1．6．4 毛细管电泳法

1．6．5 流动注射分析技术在α-淀粉酶活性测定中的应用

1．7 顺序注射分析技术

1．7．1 顺序注射分析技术的特点

1．7．2 顺序注射技术在酶分析中的应用

第二章 顺序注射光度法测定α-淀粉酶活性的研究

2．1 引言

2．2 实验部分

2．2．1 仪器装置

2．2．2 试剂及溶液配制

2．2．3 实验原理

2．2．4 实验流路及步骤

2．3 结果与讨论

2．3．1 实验参数的优化

2．3．2 最佳实验条件

2．4 分析性能

2．4．1 线性晌应范围

2．4．2 精密度

2．4．3 检出限

2．4．4 分析性能总结

2．5 实际样品的测定

2．5．1 样品预处理

2．5．2 实际样品测定结果

2．6 运动压力测验

2．7 实验小结

第三章 土壤中不同形态磷的顺序注射在线浸提光度分析技术的研究

3．1 引言

3．2 实验部分

3．2．1 仪器装置

3．2．2 试剂及溶液配制

3．3 土壤中不同结合态磷的浸提

3．3．1 实验步骤及流路

3．3．2 结果与讨论

3．4 磷的顺序注射光度分析方法

3．4．1 实验流路及步骤

3．4．2 结果与讨论

3．4．3 干扰实验

3．4．4 最佳实验条件

3．5 分析性能

3．5．1 标准曲线

3．5．2 精密度

3．5．3 检出限

3．5．4 分析性能总结

3．6 实际样品测定

3．6．1 离线小柱法测定结果

3．6．2 在线微柱浸提法测定结果

3．7 实验总结

第四章 结论

参考文献

致谢

在读硕士期间撰写的论文