真菌性角膜炎的菌种鉴定

摘要

本文探讨PCR结合DNA测序技术检测真菌性角膜炎的临床应用价值。 方法：应用半巢式PCR扩增ITS2/5.8SrDNA区域来检测标准真菌菌株和15例临床疑诊真菌性角膜炎患者角膜刮片中的真菌DNA。结果与涂片镜检和真菌培养的诊断阳性率相比较。另外，在第一轮扩增中，同时检测标本中的真菌和细菌DNA，以确定是否合并细菌感染。结果：应用半巢式PCR技术所有标准真菌和12例临床疑诊真菌性角膜炎的角膜刮片中真菌检测均呈阳性，但是标准细菌和正常人角膜组织真菌检测均阴性，扩增片段长约290bp，半巢式PCR扩增共耗时5小时。DNA测序确定菌种。敏感性为75﹪，真菌培养敏感性为86.6﹪；镜检敏感性为40﹪。通过孢子稀释法检测，MPCR和半巢式PCR的检测灵敏度分别为5个和1个茄病镰刀菌孢子。DNA测序后确定了菌种。 结论：扩增ITS2/5.8SrDNA的半巢式PCR及DNA序列分析技术是一种快速、敏感、特异、可靠的诊断真菌性角膜炎的实验室方法，为后续的临床治疗打下了良好的基础，具有良好的临床应用前景。

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综述 真菌性角膜炎菌种调查