亚香棒虫草内生真菌培养及产多糖培养基的优化

摘要

从江西宜春市上高县采集长约10cm，直径约0.3cm且新鲜、无病虫损坏的亚香棒虫草(Cordyceps hawkesii Gray)若干，包含有一个子实体和两个子实体两种类型。进行石蜡包埋组织切片，显微成像鉴定。并分离提取其氨基酸，进行薄层层析分析。研究了亚香棒虫草的解剖结构特征和氨基酸组成特征。
　　利用微生物分离培养技术从亚香棒虫草中分离得到的内生真菌若干，从中筛选4株典型菌株。采用CTAB法提取真菌的总DNA，并采用PCR技术，以提取的总DNA为模板扩增其Its序列。经基因测序和同源序列比对，利用MEGA6.0软件构建系统发育树，用邻接法（Neighbor-joining， NJ)重复比对1000次。结合形态、生理生化结果和基因序列比对结果，表明筛选到的四个内生真菌典型菌株都属于毛霉菌属，不过它们所属的种不同，ZHENJUN3属于鲁氏毛霉种，ZHENJUN4属于总状枝毛霉种，而ZHENJUN6和ZHENJUN7都属于卷枝毛霉种。
　　采用苯酚硫酸法制作葡糖糖标准曲线并测定各真菌产多糖的量，选定ZHENJUN3为种子菌株进行产多糖发酵条件的优化。结果表明，亚香棒虫草内生真菌ZHENJUN3在胞外、胞内都会产生虫草多糖，其结构和种类尚待进一步研究。选用乳糖黄豆粉培养基时胞外产多糖转化率最高；选用蔗糖黄豆粉培养基时胞内产多糖转化率最高，生物量选用蔗糖黄豆粉培养基时产率最高。胞外多糖和胞内多糖的最高产量分别为4.764 mg/ml和4.914 mg/ml.

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第1章 引言

1.1 亚香棒虫草概述

1.2 亚香棒虫草的人工培养

1.3 亚香棒虫草的生长周期

1.4 亚香棒虫草的化学成分

1.5 亚香棒虫草的功效

第2章 材料、设备与方法

2.1 试验材料

2.2 试剂及培养基配制

2.3 培养基

2.4 试验设备及耗材

2.5 实验方法

第3章 实验结果与分析

3.1 亚香棒虫草部分部位组织切片显微摄影

3.2 氨基酸种类分析

3.3 内生真菌形态鉴定结果分析

3.4 内生真菌DNA提取与鉴定结果分析

3.5 PCR产物电泳结果分析

3.6 系统发育发育树的构建与分析

3.7 产胞外多糖发酵条件优化

第4章 结论

4.1组织切片

4.2菌株的分离和鉴定

4.3 发酵产糖培养基的优化

致谢

参考文献