马立克氏病病毒UL13蛋白激酶的体外表达及抗体制备

摘要

利用Bac-to-Bac()真核表达系统体外过表达并纯化得到具有较高天然生物活性的外源蛋白，是进行蛋白质功能研究采用的方法之一。疱疹病毒科保守性蛋白激酶(conservedherpesvirusproteinkinases,CHPKs)在疱疹病毒生长复制过程的生物学作用一直是疱疹病毒研究的热点，然而在不同疱疹病毒科成员之间，CHPKs对病毒的生长复制的影响不同。本研究利用Bac-to-Bac()真核表达系统体外表达马立克氏病病毒(Marek'sdiseasevirus,MDV)UL13蛋白激酶，成功构建了rBac-His-UL13，rBac-His-EGFP和rBac-His三种重组杆状病毒，同时通过对UL13蛋白和EGFP蛋白表达和收获条件进行优化，确定了UL13蛋白和EGFP蛋白的最佳表达条件和蛋白收获时间。初步建立基于Bac-to-Bac()HT载体的真核表达蛋白质纯化平台，为研究MDVUL13蛋白激酶的生物学功能提供必需的研究材料。通过体外蛋白摄入的方法研究MDVUL13蛋白激酶对MDV生长的影响，结果发现：MDVUL13蛋白激酶对RB-1B病毒空斑大小的形成无明显影响。 利用基因免疫法制备抗MDVUL13全长蛋白的多克隆抗体，并利用不同方法制备的抗MDVUL13蛋白激酶的抗体对MDVUL13蛋白激酶进行了细胞内表达的检测，同时应用绿色荧光蛋白(GreenFluorescentProtein，GFP)与UL13蛋白激酶融合表达进行UL13蛋白激酶的进一步细胞内定位，证明了MDVUL13蛋白激酶定位于细胞核内。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：英文缩写、计量单位

声明

综述一：疱疹病毒科保守性蛋白激酶研究进展

综述二：马立克氏病病毒（Marek's disease virus,MDV)UL13蛋白激酶研究进展

第一章：MDV UL13蛋白在昆虫细胞中的表达和优化

1、材料与方法

2、结果

3、讨论

第二章：MDV UL13蛋白对MDV(RB-1B)体外生长的影响

1、材料与方法

2、结果

3、讨论

第三章：抗MDV UL13全长蛋白的多克隆抗体的制备及抗体的应用

1、材料与方法

2、结果

3、讨论

参考文献

全文小结

致谢