富硒灵芝菌丝体粗多糖对CNE2鼻咽癌细胞抑制作用、淋巴细胞增殖活性的研究及保健果冻的研发

摘要

目前，对于硒和灵芝多糖的药理研究已经逐步深入，临床上也有了良好的应用。而灵芝硒多糖的研究还处于起步阶段，作用机理和其他的应用还需要更深入的研究，更多的药理活性亟待发现。通过前期的市场调研发现，目前市场上尚未发现以富硒灵芝菌丝体为原料的保健食品上市。因此，通过更多的实验验证其安全性与有效性，并将其中的有益成分（如灵芝硒多糖）提取出来适应大规模的工业化生产，将为开发具有增强免疫力的功效的保健食品提供理论参考，具有重要的研究意义和广阔的市场前景。
　　本研究的创新点是，应用工业化生产的液体发酵技术，将硒与灵芝有机的结合在一起，研制出富硒灵芝;阐明富硒灵芝菌丝体多糖对鼻咽癌细胞和外周血来源淋巴细胞的影响，具有增强免疫功效的效果，目前关于灵芝硒多糖对于鼻咽癌细胞的增殖活性的影响尚未见报道。并研发出富硒灵芝保健果冻。
　　本研究用500L的工业发酵罐进行灵芝的富硒发酵培养，培养参数为温度28±1℃，搅拌速率100r/min-120r/min，pH控制在6.5-7.0，罐压0.2kg/cm2-0.3 kg/cm2，通气量0.5(V/V·min)，培养时间70h左右时，500L的不锈钢发酵罐中可以生产发酵液300L，菌丝体浓度达到30％（湿重）以上，总糖含量在20g/L以上。并通过多次的单因素实验，确定了富硒灵芝多糖最适合的提取条件为:中性蛋白酶添加量为1.5％(W/W)，料液比为1∶30，最适酶解温度为50℃、pH值为5，酶解时间为60min，无水乙醇添加量为40％。并通过脱色、脱蛋白、透析等纯化步骤得到了较为纯净的富硒灵芝菌丝体粗多糖。对该硒多糖进行了化学性质的检验。其中发酵液中总硒的含量为0.3mg/L，富硒灵芝菌丝体多糖中的硒含量为0.08mg/Kg，发酵液中的多糖含量为2.7％，砷的含量为0.01 mg/L，铅的含量为0.05mg/L，汞的含量为未检出(＜0.005 mg/L)。致病菌未检出。用纯化后的硒多糖进行两项免疫功能实验，观察富硒灵芝菌丝体粗多糖对鼻咽癌细胞的体外增殖活性的影响，结果表明富硒组的抑制率高于普通组。另外，通过人外周血来源淋巴细胞的增殖实验，结果显示富硒组的增殖指数明显高于普通组。说明在这两个功能实验中硒和灵芝多糖存在协同作用。最后利用富硒灵芝发酵液自身的特点，研发了一款以富硒灵芝发酵液为原料的保健果冻，最优配方为富硒灵芝滤液10％，果冻粉12％，异麦芽酮糖醇4％，柠檬酸0.06％。

目录

摘要

综述

1．1 灵芝生物学的研究进展

1．2 硒的生物学研究进展

1．3 富硒灵芝培养工艺的研究进展

第一章 富硒灵芝菌丝体粗多糖的制取及成分检测

第一节 富硒灵芝菌丝体的发酵培养

1 材料

2 实验方法

3 结果

4 讨论

第二节 富硒灵芝菌丝体粗多糖的提取

1 材料

2 实验方法

3 结果

4 讨论

第三节 富硒灵芝菌丝体粗多糖的纯化

1 材料

2 实验方法

3 结果

4 讨论

第四节 富硒灵芝菌丝体成分检测

1 材料

2 试验方法

3 结果

4 讨论

本章小结

第二章 富硒灵芝菌丝体粗多糖的功能实验

第一节 MTT法检测富硒灵芝菌丝体粗多糖对CNE2鼻咽癌细胞的体外增殖活性的影响

1 材料

2 实验方法

3 结果

4 讨论

第二节 MTT法检测富硒灵芝菌丝体粗多糖对人外周血来源淋巴细胞的增殖影响实验

1 材料

2 实验方法

3 结果

4 讨论

本章小结

第三章 富硒灵芝保健果冻的研制

1 材料

2 实验方法

3 结果

4 讨论

本章小结

参考文献

致谢

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