附子多糖联用乌头碱对肝细胞肝癌的作用及机理初步研究

摘要

近年来，世界各国的恶性肿瘤发病情况呈上升趋势，其中肝癌的死亡率在恶性肿瘤中排名第三。扶正祛邪是抗肿瘤的根本大法，附子具有回阳救逆、补火助阳、散寒止痛之功。近年来的研究显示附子提取液具有抗癌、强心、抗衰老和增强免疫的作用，其主要有效成分为附子多糖和乌头碱。本研究旨在探讨附子多糖和乌头碱联合抗肝癌作用特点和机理，为临床合理应用附子“扶正祛邪”抗肿瘤提供实验依据。
　　目的:研究附子多糖对免疫的影响及免疫抗肝癌的作用;研究乌头碱对肝癌的直接杀伤作用及对免疫的损伤作用，探讨附子多糖和乌头碱共同抗肝癌的效应及二者组成的改变对效应的影响，从而评级临床附子“重用”、“重用+久煎”的合理性。
　　方法:用荧光染色法观察附子多糖、乌头碱及不同组成对Hepa1-6肝癌细胞凋亡的影响，用MTT法观察附子多糖、乌头碱及不同组成对Hepa1-6肝癌细胞、脾细胞增殖的影响及脾细胞杀伤Hepa1-6肝癌细胞的作用;观察附子多糖、乌头碱及不同组成对荷瘤C57小鼠的抑瘤率及免疫的影响。
　　结果:1.附子多糖对Hepa1-6肝癌细胞的增殖和凋亡无明显影响（P＞0.05），能促进体外培养小鼠脾细胞的增殖(P＜0.01)，且具有剂量依赖性，可增强脾淋巴细胞杀伤肝癌细胞的能力;对Hepa1-6荷瘤小鼠的肿瘤（瘤重）有微弱的抑制作用（抑制率为18.22％），可增加肝癌荷瘤C57小鼠脾脏的重量及脾脏指数(P＜0.05);显著增加脾脏中CD4+和CD8+T细胞的数量(P＜0.05)。
　　2.乌头碱对Hepa1-6细胞增殖有显著抑制作用（P＜0.05），呈现剂量和时间依赖，能抑制体外培养小鼠脾细胞的增殖(P＜0.01)，具有一定的剂量依赖性，能促进Hepa1-6肝癌细胞凋亡，且具有剂量依赖性;对Hepa1-6荷瘤小鼠的肿瘤（瘤重）呈现一定的抑制作用，且剂量依赖，对荷瘤小鼠的脾脏重量和脾脏指数，胸腺重量和胸腺指数虽然有一定的抑制趋势，但均无显著影响(P＞0.05)。
　　3.乌头碱无效浓度（50μg·mL1），1∶10比例配比附子多糖联合使用，对Hepa1-6肝癌细胞增殖无抑制作用，乌头碱有效浓度（200和400μg·mL1）时，1∶10配比附子多糖联合使用，对乌头碱抑制Hepa1-6肝癌细胞增殖作用无影响;乌头碱有效浓度（200μg·mL-1），按1∶10配比附子多糖联合使用，对乌头碱抑制Hepa1-6肝癌细胞增殖的作用无影响，当比例为1∶20时，对乌头碱抑制Hepa1-6肝癌细胞增殖的作用有所增加;乌头碱有效浓度（200μg·mL1），按1∶5、1∶10、1∶20配比附子多糖联合使用，随着附子多糖比例的增加，乌头碱对脾细胞增殖的抑制作用逐渐减弱;并能促进离体脾细胞杀伤肝癌细胞;乌头碱有效浓度（150μg·kg-1），1∶10、1∶20配比附子多糖联合使用，对Hepa1-6荷瘤C57小鼠的抑瘤作用增加(P＜0.05);乌头碱有效浓度（150μg·kg-1），1∶40配比附子多糖联合使用，对Hepa1-6荷瘤C57小鼠的抑瘤作用无进一步增加;乌头碱有效浓度(150μ g·kg1)与附子多糖联合使用三个比例组(1∶10、1∶20、1∶40)，对其脾脏重量和脾脏指数、胸腺重量和胸腺指数均有促进作用;可增加脾脏中巨噬细胞数量，增加CD4+和CD8+T细胞数量。
　　结论:附子多糖具有增强免疫功能，在增加免疫有效剂量范围内显示出一定的免疫抗肿瘤效应，但对肝癌无直接抑制作用;乌头碱有直接抗肿瘤效应，且对荷瘤小鼠有免疫损伤作用;附子多糖和乌头碱联合使用，可增强抗肿瘤效应，改善乌头碱对Hepa1-6荷瘤小鼠造成的免疫损伤，乌头碱与附子多糖组成的改变对抗肿瘤效应有一定的影响。

目录

声明

摘要

前言

第一部分 附子多糖对肝癌及其免疫功能的影响

1 实验材料

2 实验方法

3 实验结果

3．1 附子多糖的提取率及多糖含量的测定

3．2 附子多糖对体外培养Hepa1-6肝癌细胞增殖的影响

3．3 附子多糖对Hepa1-6荷瘤小鼠肿瘤生长的影响

3．4 附子多糖对离体培养小鼠脾细胞的影响

3．5 附子多糖对Hepa1-6荷瘤小鼠免疫功能的影响

3．6 附子多糖对Hepa1-6肝癌细胞凋亡的影响

4．讨论

第二部分 乌头碱对肝癌及其免疫功能的影响

1 实验材料

2 实验方法

3 实验结果

3．1 乌头碱对体外培养Hepa1-6肝癌细胞增殖的影响

3．2 乌头碱对Hepa1-6荷瘤小鼠肿瘤生长的影响

3．3 乌头碱对免疫细胞和机体免疫的影响

3．4 乌头碱对离体培养Hepa1-6肝癌细胞凋亡的影响

4．讨论

第三部分 附子多糖和乌头碱联用对肝癌及免疫的作用

1 实验材料

2 实验方法

3 实验结果

3．1 附子多糖和乌头碱联用对Hepa1-6肝癌细胞增殖的作用

3．2 附子多糖和乌头碱联用对脾细胞增殖的作用

3．3 附子多糖和乌头碱联用对脾细胞杀伤Hepa1-6肝癌细胞的影响

3．4 附子多糖和乌头碱联用对Hepa1-6荷肝癌小鼠抗肿瘤效应

3．5 附子多糖和乌头碱联用对Hepa1-6荷肝癌小鼠免疫的影响

4．讨论

小结

参考文献

附录

攻读硕士学位期间取得的学术成果

致谢