梅岭霉素产生菌原生质体抗药性选育及检测方法的研究

摘要

本文通过对梅岭霉素(Meilingmycin)产生菌南昌链霉221菌株的原生质体对链霉素致死浓度的测定,采用不同浓度的诱变剂NTG对菌株的原生质体进行诱变处理,诱变后的原生质体涂布在含有致死浓度链霉素的RM2再生平板上,获得大量的链霉素抗性基因(str)突变株.然后通过对突变株的筛选,获得梅岭霉素高产菌株74＃,该菌株产梅岭霉素的能力比原始出发菌株提高了58.18﹪..通过统计学分析表明,菌株的抗药性与产素突变密切相关.建立了梅岭霉素产生菌原生质体筛选方法,为梅岭霉素高产菌株的选育进行了有益的尝试.采用L<,9>(3<'4>)正交实验设计,寻找了梅岭霉素产生菌较佳的种子培养基条件:碳源2.4﹪,黄豆饼粉0.5﹪,酵母膏0.2﹪,KH<,2>PO<,4>0.14﹪.本文同时通过对梅岭霉素的高效液相色谱法(HPLC).紫外检测法(UV)和杀蚕生物活性检测法(BA)的研究,分别建立了梅岭霉素(HPLC)法、UV法和BA法.通过三种检测法之间的相关性回归分析,三种检测方法相互呈直线关系.12个不同发酵单位的梅岭霉素发酵样品,分别采用HPLC法、UV法和BA法进行梅岭霉素发酵单位检测,对结果的进一步分析表明:UV法与HPLC法相比测定误差6.28﹪;BA法分别与HPLC法和VU法检测结果相比,其误差分别为10.48﹪和3.95﹪.紫外检测法为梅岭霉素测定提供较快速、简便、准确的测定方法.

目录

文献综述

0.引言

1.抗生素产生菌的推理选育

1.1推理选育的概念

1.2抗药性突变型

2.大环内酯类抗生素的检测

2.1大环内酯类抗生素的基本性质

2.2大环内酯类抗生素的检测方法

ABSTRACT

引言

实验材料与方法

1.材料

2.方法

2.1出发菌株的自然分离和选育

2.2南昌链霉菌原生质体的制备

2.3原生质体的致死浓度的测定

2.5链霉素抗性基因(str)突变株高产菌株的筛选

2.6种子培养基配方的优化

2.7高产菌株在种子培养基中的生长代谢研究

2.8测定项目和方法

2.9梅岭霉素的测定

2.10梅岭霉素发酵液胞内、外产物的生物学活性测定

2.11紫外检测方法的生物学活性证明

实验结果与分析

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1.诱变出发菌株的自然分离

2原生质体的制备与原生质体的抗药性测定

3.链霉素抗性基因(str)突变株的制备结果

4.链霉素抗性基因(str)突变株的制备与筛选

5.高产菌株发酵条件的优化

6.高产菌株在种子培养基中的生长研究

第二部分梅岭霉素测定方法的研究

7梅岭霉素测定方法的研究

小结与讨论

致谢

参考文献