竹黄分离菌液态发酵有色产物的分离纯化及功能研究

摘要

竹黄是一种珍贵的中药材，其子座中含有多种活性成分，如竹红菌素、竹黄多糖等，具有通经散瘀、消痰止咳、强身健体和镇静等作用。随着对竹黄研究的不断地深入，其药用价值越来越突出，但由于天然竹黄资源有限，无法满足人们对其利用的需求，为此人们开始研究竹黄的分离菌株，对其进行人工培养，期待能够得到竹黄的活性成分。本论文以竹黄分离菌苇状节孢霉（Arthriniumarundinis）为试验菌株，研究其在培养过程中的生长规律、有色产物的分离鉴定及其稳定性和基本功能，结果如下:
　　1、竹黄分离菌培养生长规律:在固体培养基中，初期菌丝体为白色，呈辐射状向周围生长，培养4d后开始产生少量红色物质，该产物释放在菌丝体外，存在于培养基中，培养到后期菌丝体颜色变暗，生长缓慢;在液体培养基中，菌丝体为白色，黏滑，散生，培养3d后开始有少量红色物质产生，该产物释放在菌丝体外，存在于培养基中，后期生长缓慢。
　　2、有色发酵产物的分离鉴定:运用大孔吸附树脂对竹黄分离菌发酵液中红色产物进行吸附分离，选择HPD300作为吸附树脂，50％的乙醇为洗脱液，获得有色发酵产物的富集物。通过薄层层析、高效液相色谱分离发现该有色发酵产物的极性很强，常规方法难以实现该产物的的有效分离。利用发酵液酸水解、有机溶剂萃取、两次硅胶柱层析得到了两种纯度较高的物质，通过质谱检测，两种物质的分子量分别为191和338。利用无色亚甲基蓝显色反应对发酵液的正丁醇萃取物进行定性鉴定，该产物很有可能为苯醌或萘醌类物质，排除其为蒽醌类色素的可能性。
　　3、有色发酵产物的稳定性:对竹黄分离菌有色发酵产物的稳定性进行研究后发现，温度、光照对其稳定性影响不是很大，该有色产物的稳定性受pH和金属离子的影响较明显，在酸性环境中比碱性环境中要稳定，不同的金属离子对有色发酵产物的稳定性影响也不同，在一定的浓度范围内，Mg2+、Ca2+、Zn2+、Al3+、Cr3+、Cu2+、Na+对有色发酵产物的稳定性影响较小，Fe3+对有色发酵产物具有减色作用。
　　4、有色发酵产物粗品的功能:对竹黄分离菌发酵液的正丁醇萃取物进行抑菌试验后，发现该部分的发酵产物对腐皮镰孢霉和黑曲霉有较强的抑制作用，而对枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌无明显的抑制作用。通过抗氧化试验发现，竹黄分离菌发酵液的正丁醇萃取物的抗氧化能力不是很强。

目录

声明

摘要

第一章 文献综述

1．1 竹黄概述

1．1．1 简介

1．1．2 竹黄的生态学特性

1．1．3 竹黄的化学成分

1．1．4 竹黄的药理活性

1．1．5 竹黄的临床应用

1．1．6 竹黄的分离培养

1．1．7 竹黄茵人工培养

1．1．8 苇状节孢霉

1．2 立题意义和主要研究内容

1．2．1 立题意义

1．2．2 主要研究内容

第二章 竹黄分离菌的培养及其有色发酵产物的分离鉴定

2．1 材料与仪器

2．1．1 材料

2．1．2 仪器

2．2 实验方法

2．2．1 配制培养基

2．2．2 菌种培养

2．2．3 全波长扫描

2．2．4 有机溶剂萃取

2．2．5 特征颜色反应

2．2．6 大孔吸附树脂分离有色发酵产物

2．2．7 HPLC检测

2．2．8 竹黄分离菌有色发酵产物的分离纯化及鉴定

2．3 实验结果

2．3．1 斜面及平板培养

2．3．2 种子及发酵培养

2．3．3 全波长扫描

2．3．4 特征颜色反应

2．3．5 大孔吸附树脂分离有色发酵产物

2．3．6 HPLC检测

2．3．7 竹黄分离菌有色发酵产物的分离纯化及鉴定

2．4 本章小结

第三章 竹黄分离菌有色发酵产物稳定性及其功能的研究

3．1 材料与仪器

3．1．1 材料

3．1．2 仪器

3．2 实验方法

3．2．1 竹黄分离菌有色发酵产物稳定性试验

3．2．2 竹黄分离菌有色发酵产物抑菌试验

3．2．3 竹黄分离菌有色发酵产物抗氧化试验

3．3 试验结果

3．3．1 竹黄分离菌有色发酵产物稳定性试验

3．3．2 竹黄分离菌有色发酵产物抑菌试验

3．3．3 竹黄分离菌有色发酵产物抗氧化试验

3．4 本章小结

第四章 结论与展望

4．1 结论

4．2 展望

参考文献

致谢