毒死蜱诱导西花蓟马差异蛋白分析及细胞色素P450CYP6基因克隆与发烟施药技术研究

摘要

西花蓟马Frankliniella occidentalis(Pergande)是世界上重要的农作物害虫和检疫对象，我国于2003年在北京首次发现。其体型小，隐匿性强，繁殖方式独特，抗药性发展迅速，为研究抗药性形成机制与有效防治带来了较大困难，本研究通过采用“药膜+浸叶”法，对西花蓟马进行室内抗性筛选，并利用iTRAQ技术结合LC-MS/MS技术分析敏感品系西花蓟马与抗性品系的差异蛋白质组，选取其中差异表达蛋白编码基因细胞色素P450CYP6进行克隆与表达;并对热力发烟施药技术防治西花蓟马进行了相关研究，结果如下:
　　 1.采用“药膜+浸叶”法对西花蓟马室内群体进行抗毒死蜱筛选，测定西花蓟马对毒死蜱的敏感水平，利用毒死蜱LC75处理西花蓟马二龄若虫，在建成一定规模的群体后，再次生物测定重复上述过程，共处理19次，西花蓟马对毒死蜱的敏感性下降39倍。
　　 2.本研究以敏感品系的西花蓟马为对照组，分别收集敏感品系和抗性品系的西花蓟马各300头，提取蛋白，并进行iTRAQ标记和LC-MS/MS分析鉴定。共鉴定出773个蛋白质，其中的差异表达的蛋白为20个。差异蛋白主要有连接、催化、转运及酶调节等分子功能;主要参与了代谢、发育、生物调节、应激反应等生物过程;绝大部分蛋白质处于细胞、细胞器、高分子中，有极少部分存在于胞外区。这些差异蛋白还参与了各种通道途径，如代谢途径、次级代谢产物的生物合成、氧化磷酸化等。通过分析差异蛋白，参照NCBI相应序列，设计引物，克隆西花蓟马细胞色素P450CYP6基因，并进行外源表达。
　　 3.本研究选取不同配比的热雾剂，以不同的溶剂混合，并选用不同喷药方式测定了热力烟雾机对西花蓟马的室内防效。结果表明，烟雾防治效果要远远高于常规水雾防治效果，最高防治效果能达到95％。热雾剂以药液∶溶剂∶水为1∶3∶6比例配制时雾滴分布均匀，一个视野内数目多，利于扩散弥漫。

目录

声明

摘要

上篇 文献综述

第一章 西花蓟马

1 西花蓟马的起源与分布

2 西花蓟马的寄主范围与危害

3 西花蓟马的形态特征与生物学特性

4 西花蓟马的抗药性及其防治

5 西花蓟马的烟雾防治

第二章 差异蛋白质组学研究

1 基本特征

2 差异蛋白组学研究

3 差异蛋白质组学的研究方法

4 差异蛋白研究的应用前景

第三章 西花蓟马细胞色素P450基因的外源表达

1 细胞色素P450基因的结构与功能

2 细胞色素P450基因与抗药性

3 细胞色素P450基因的表达

下篇 研究内容

第一章 西花蓟马抗毒死蜱室内筛选

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

第二章 西花蓟马差异蛋白分析及细胞色素P450CYP6基因克隆

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

第三章 发烟施药技术研究

1 材料与方法

2 结果与分析

3 讨论

全文小结

附录

参考文献

攻读硕士期间发表或待发表论文情况

致谢