参麦联合顺铂体外对人胃癌细胞SGC7901生长抑制作用的研究

摘要

目的：探讨顺铂(Cisplatin，DDP)单用及联合参麦共同作用时对人胃癌细胞株SGC7901的生长抑制作用并探讨其可能机制，为胃癌的治疗提供新的理论基础。
　　方法：将人胃癌细胞SGC7901常规培养于含10％胎牛血清、青霉素-链霉素溶液(100X)、PH为7.2-7.3的RPM1640培养液中，在37℃、5%CO2及饱和湿度培养箱中培养24h、48h、72h。实验分阴性对照组、DDP组(0.625μg/ml、1.25μg/ml、2.5μg/ml、5μg/ml)、联合用药组(D0.3125+S20、D0.625+S20、D1.25+S20、D2.5+S20)、参麦组(S)20μl/ml。分别采用：1)四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞体外增殖抑制情况；2)Hoechst33258染色观察细胞凋亡形态学变化；3)流式细胞技术检测细胞凋亡率；4)细胞免疫组织化学检测用药前后Bcl-2和Bax蛋白表达改变；5)RT-PCR测VEGF、Bcl-2和Caspase3 mRNA的表达变化。
　　结果：1)SGC7901细胞与不同浓度的DDP共同培养，细胞生长受到不同程度的抑制，并随时间的延长抑制率逐渐升高，24h时，DDP组DDP浓度为5μg/ml时、联合用药组DDP浓度为1.25μg/ml及以上时，抑制率与对照组相比，差别有统计学意义(P<0.05)；48h时，DDP组DDP浓度为2.5μg/ml及以上、联合用药组DDP浓度为0.625μg/ml及以上时，与对照组相比差别有统计学意义；72h时，DDP组DDP浓度为1.25μg/ml及以上时、联合用药各浓度组，与对照组相比，差别均有统计学意义(P<0.05)。单用药物组与联合用药组比较，DDP组与DDP浓度减半联合组相比，差别无统计学意义(P>0.05)。2)药物作用48h后，行Hoechst33258染色可见阴性对照组细胞细胞核呈卵圆形，染色均匀，顺铂组及联合用药组可见部分细胞核荧光增强，胞核缩小呈浓缩现象，细胞核的染色质高度凝聚、荧光显著增强，并有部分细胞核边缘化，甚至裂解为碎块，产生凋亡小体。3)流式细胞术分析显示：药物作用48h后，DDP1.25、2.5μg/ml组，DDP0.625μg/ml+参麦20μl/ml、DDP1.25μg/ml+参麦20μl/ml组、参麦20μl/ml组细胞凋亡率分别为(4.08%±0.08%)、(18.90%±0.17%)、(5.12%±0.43%)、(18.92%±0.06%)、(4.03%±0.10%)，与阴性对照组(3.71%±0.12%)相比，DDP1.25μg/ml组及参麦组差别无统计学意义，余组差别有统计学意义(P<0.05)，DDP组与DDP减半联合组细胞凋亡率差别无统计学意义。4)免疫细胞化学染色结果显示：Bcl-2、Bax在SGC7901细胞胞浆中均有表达(84.00±1.63，15.00%±1.53%)，DDP单用及联合参麦共同作用48h后，Bcl-2蛋白表达降低，Bax蛋白表达升高，DDP组与DDP减半联合组Bcl-2、Bax的表达差异无统计学意义(P>0.05)。5)RT-PCR结果显示与对照组相比，药物作用后Bcl-2、VEGF mRNA表达降低，Caspase-3 mRNA表达升高。
　　结论：1)参麦与顺铂联合对胃癌细胞的抑制具有协同作用。2)与单用顺铂相比，参麦与顺铂联合可有效减少顺铂的用药剂量，促进凋亡。3)参麦联合顺铂可协同减少肿瘤细胞VEGF的表达，是其体外抗肿瘤作用的机制之一。4)参麦联合顺铂诱导凋亡的作用与协同促进Caspase-3、Bax高表达及Bcl-2的低表达有关。