高表达KRT8促进胃癌转移和影响患者预后

摘要

目的：
　　细胞角蛋白（Keratin，KRT），是广泛存在于上皮细胞中间丝中的结构蛋白，参与固定、维护细胞及细胞核形态，分为多种型别。本研究检测分析KRT8在胃癌组织、癌旁组织及5种胃癌细胞株中的表达差异，探讨其对胃癌生物学表型的影响及在胃癌发展过程中的作用机制。
　　方法：
　　1.运用公共数据库预测KRT8在胃肿瘤患者中的表达量，采用qRT-PCR分别检测50例胃癌及其癌旁组织中KRT8的mRNA水平的表达丰度。
　　2.收集70例胃癌组织标本，运用免疫组织化学染色技术检测KRT8蛋白在其中的表达差异，找出KRT8的表达与胃癌临床病理因素及预后关系。
　　3.应用Western blot技术分析5种胃癌细胞系中KRT8的蛋白表达差异。采用基因过表达和基因干扰技术分别过表达和沉默KRT8并验证其效率。通过Tanswell迁移实验分别评估胃癌细胞在过表达组、沉默组中迁移能力的变化。
　　4.采用Western blot检测细胞迁移、EMT相关蛋白变化及TGF-β通路的变化。
　　结果：
　　1.QRT-PCR结果显示相对于正常组织中KRT8的mRNA表达量在胃癌组织中表达增高（68%，34/50），与肿瘤公共数据库预测结果一致。
　　2.免疫组化结果显示KRT8的胃癌组织中的表达与肿瘤的侵袭深度（p=0.002）和临床分期（p=0.025）相关，与年龄、性别、瘤体直径、分化程度无关。
　　3.生存曲线分析结果揭示KRT8表达与胃癌患者的预后关联，Cox’s比例风险模型结果说明胃癌患者中高表达KRT8是其差预后的诊断指标。
　　4.胃癌细胞系AGS中沉默KRT8的表达，能显著抑制细胞迁移和EMT的产生；在细胞系HGC-27中过表达KRT8促进细胞迁移和EMT的发生。
　　5.KRT8可能通过TGFβ/smad信号通路调节胃癌细胞的EMT和转移。
　　结论：
　　KRT8在胃癌进展过程中具有重要意义，可能通过诱导胃癌细胞发生EMT而促进胃癌的转移，有望成为胃癌转移以及患者预后评价的一个新的分子标志。

目录

声明

英文缩写略表

第一章 绪 论

1.1胃癌的流行病学调查

1.2 胃癌发生的分子机制

1.3 胃癌与上皮间质转化（EMT）

1.4 KRT8与疾病

第二章 研究目的、方法、实验设计方案和意义

2.1 研究目的

2.2 研究方法

2.3 实验设计

2.4 研究意义

第三章 KRT8在胃肿瘤组织中的表达及与患者预后的关系

3.1 材料和试剂

3.2 实验方法

3.3 结果

3.4 讨论

第四章 上调KRT8影响胃肿瘤细胞生物学行为

4.1 材料与仪器

4.2 方法

4.3 主要结果

4.4 讨论

第五章 RNAi抑制KRT8表达对胃肿瘤细胞生物学行为的影响

5.1材料与仪器

5.2 方法

5.3 主要结果

5.4 讨论

第六章 KRT8影响胃癌进展相关机制初步探讨

6.1材料与仪器

6.2 方法

6.3 主要结果

6.4 讨论

结论与展望

一、主要结论

二、工作展望

参考文献

致谢

硕士期间所发论文