NFAT2在原发性肝细胞癌中的表达及在肝癌细胞中的作用

摘要

目的：
　　探讨激活的T细胞核因子2(nuclear factor of activated T cells2, NFAT2)在原发性肝细胞癌癌组织与癌旁组织中表达差异；过表达NFAT2对肝癌细胞增殖及凋亡影响；及NFAT2促进肝癌细胞凋亡的通路。
　　方法：
　　（1）选取40例肝癌患者，提取其癌组织与癌旁组织，通过蛋白质印迹法检测其NFAT2蛋白的表达情况；
　　（2）我们通过反转录PCR、限制性内切酶酶切、目的DNA与载体DNA连接、大肠杆菌转换、质粒DNA提取等方法构建了pcDNA3.1-NFAT2真核载体质粒；
　　（3）我们将构建好的pcDNA3.1-NFAT2载体质粒转染至Huh7和PLC肝癌细胞系，并设立实验组和对照组，通过CCK8实验方法检测NFAT2过表达后对Huh7和PLC肝癌细胞系增殖能力的影响；克隆形成实验检测NFAT2过表达后对Huh7肝癌细胞系增殖能力的影响；流式细胞术检测NFAT2过表达后对Huh7肝癌细胞系凋亡的影响；
　　（4）蛋白质印迹检测转染pcDNA3.1-NFAT2载体质粒后的Huh7肝癌细胞系相关凋亡蛋白Caspase-8及Caspase-3的表达变化。
　　结果：
　　（1）蛋白印迹法结果显示NFAT2在肝癌组织中的表达明显低于癌旁组织(t=11.06，P<0.05)；
　　（2）CCK8实验结果显示， Huh7和PLC肝癌细胞系转染NFAT2后，肝癌细胞增殖率明显降低(P<0.01)；克隆形成实验结果显示，NFAT2质粒转染Huh7肝癌细胞系后，克隆形成数明显减少(t=6.50,P<0.05)，流式细胞术实验结果显示，NFAT2质粒转染Huh7肝癌细胞系后，凋亡率明显增加(P<0.05)；
　　（3）蛋白印迹法结果显示，NFAT2质粒转染Huh7肝癌细胞系后，相关凋亡蛋白Caspase-8及Caspase-3表达增加。
　　结论：
　　（1）肝癌组织中NFAT2的表达明显低于癌旁组织；
　　（2）NFAT2过表达抑制肝癌细胞增殖并促进其凋亡；
　　（3）NFAT2可以通过增加凋亡蛋白Caspase-8及Caspase-3的表达来促进肝癌细胞凋亡。

目录

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英文缩略语索引

引言

第一章 原发性肝细胞癌患者癌组织与癌旁组织中NFAT2蛋白表达的比较

1.实验目的

2.实验材料

2.1.组织来源

2.2.主要试剂与仪器

2.3. 实验试剂的配制

3.实验方法

3.1.蛋白样品提取方法

3.2. SDS-PAGE上样电泳

3.3.转膜

3.4.封闭抗体孵育

3.5.蛋白检测

3.6.统计学方法

4.实验结果

5.结果讨论

第二章 过表达NFAT2对肝癌细胞的增殖与凋亡影响及其促肝癌细胞凋亡通路的研究

1.实验目的

2.实验材料

2.1.细胞来源

2.2.主要试剂与仪器

2.3.实验主要试剂的配制

3.实验方法

3.1.细胞培养

3.2.构建pcDNA3.1-NFAT2质粒

3.3.细胞转染

3.4.CCK8 检测肝癌细胞增殖

3.5. 细胞克隆形成实验

3.6.细胞凋亡实验

3.7.相关凋亡蛋白Caspase-8及Caspase-3检测

3.8.统计学方法

4.实验结果

4.1.两种肝癌细胞增殖比较

4.2.细胞凋亡率的比较

4.3.相关凋亡蛋白的表达

5.讨论

参考文献

综述: NFAT转录因子在细胞周期及凋亡的调控作用

致谢

攻读硕士学位期间发表的学术论文