C反应蛋白基因多态性与低-高密度脂蛋白胆固醇及冠心病的关联研究

摘要

第一部分C反应蛋白基因变异与低-高密度脂蛋白胆固醇的关联研究 背景与目的 高密度脂蛋白胆固醇（High density lipoprotein cholesterol, HDL-C），参与胆固醇的逆向转运，具有抗动脉粥样硬化（Atherosclerosis，AS）的作用。AS的发展同时伴随着慢性炎症反应过程，是导致冠心病、脑卒中等严重心脑血管事件的重要危险因素。超敏C反应蛋白（High sensitive C-reactive protein, hs-CRP）是反映全身炎症程度的生物指标之一，其水平的升高能够引起动脉内膜发生局部炎症反应，从而使其内膜出现增厚甚至导致粥样斑块破裂的情况。既往研究发现，CRP基因变异与HDL-C水平的升高有显著关联，而CRP基因多态性是否与HDL-C水平降低有关未见报道。因此，本次研究探讨CRP基因多态性与HDL-C降低的关系。 对象与方法 采用流行病学整群抽样的方法，于2009年以宜兴市官林和徐舍两个镇社区人群为研究对象，最终纳入研究对象4156例，收集一般人群资料、体格检查和血生化检测数据。排除既往诊断为冠心病、慢性肾功能不全、肝功能不全、曾经服用或者正在服用降低（调节）血脂药物的对象。采用连锁不平衡结合功能位点预测的方法，同时按照少见等位基因频率（Minor allele frequency, MAF）>0.05和r2>0.8的范围选择CRP基因标签单核苷酸多态性（Tag single nucleotide polymorphism, tagSNP），结合已报道与hs-CRP水平变化相关的SNPs，最终4个tagSNPs （rs1205、rs1073715、rs876537、rs2808630）纳入分析。应用TaqMan探针技术对CRP基因4个标签单核苷酸多态性（tagSNPs）进行基因分型。采用多因素Logistic回归分析CRP基因与HDL-C降低的关系。 结果 Hs-CRP水平在rs1205和rs876537位点不同基因型之间均有显著差异， P<0.001。Logistic回归分析结果显示，rs1205和 rs876537与HDL-C水平降低显著相关，隐性模型有统计学意义，校正年龄、性别、吸烟和饮酒因素后，比数比（ OR ）值及 95% 可信区间（ 95% CI ）分别为 1.37 （ 1.11-1.69 ）和 1.32 （1.07-1.63），P值分别为0.003和0.009。在hs-CRP升高组（?1.0mg/l）中， rs1205和rs876537隐性模型与HDL-C降低有显著关联,OR（95%CI）分别为1.47 （1.10-1.98）和1.40（1.04-1.88），P值分别为0.01,0.03。在hs-CRP正常组中，rs10737175位点的变异与HDL-C降低有关,OR（95%CI）为1.85（1.16-2.95）， P值为0.01。在女性人群中，rs10737175、rs1205和rs876537 TT基因型携带者HDL-C降低的风险均显著高于CC/CT基因型携带者,OR(95% CI）分别为1.59 （1.02-2.48），1.45（1.10-1.92），1.41（1.07-1.87），P值分别为0.042、0.009和0.015。女性rs10737175 TT 基因型携带者HDL-C的水平显著低于CC+CT基因型携带者，P值为0.035. 结论 CRP 基因变异与 HDL-C 水平存在负相关， CRP 基因多态位点 rs1205、rs1073715和rs876537可能是HDL-C降低的易感位点，尤其在女性人群中更值得关注。 第二部分C反应蛋白与冠心病因果关系的孟德尔随机化分析 背景与目的 超敏C反应蛋白（High-sensitivity C-reactive protein, hs-CRP）作为一种非特异性炎症因子，参与冠状动脉粥样硬化（Atherosclerosis，AS）形成，hs-CRP水平是与冠心病（Coronary heart disease，CHD）发病有关。近年来，国内外对hs-CRP和CHD因果关系研究结果并不一致。传统流行病学研究在因果推断方面存在一定的限制性，故本研究拟以孟德尔随机化（Mendelian Randomization，MR）分析，选择CRP基因多态位点为工具变量（Instrumental variable，IV），在中国汉族人群中探讨hs-CRP水平和CHD发病之间的因果关系。 对象与方法 采用流行病学整群抽样的方法，排除既往诊断为CHD、慢性肾功能不全、肝功能不全、曾经服用或者正在服用降低（调节）血脂药物的对象后，最终纳入研究对象4156例。采用连锁不平衡结合功能位点预测的方法，按照少见等位基因频率（Minor allele frequency, MAF）>0.05和r2>0.8的范围进行标签单核苷酸多态性（Tag single nucleotide polymorphism, tagSNP）的选取，最终纳入CRP基因4个tagSNPs （rs1205、rs1073715、rs876537、rs2808630）。用线性回归模型，分析CRP基因多态性与hs-CRP的关联性。结合生存受试者工作曲线（Receiver operator characteristic curve，ROC）曲线，探讨本研究人群hs-CRP与CHD发病的切值；利用单因素Cox比例风险回归模型分别分析hs-CRP对CHD发病的相对危险度（Hazard ratio，HR）和95%可信区间（Confidence interval, CI），应用多因素Cox比例风险回归模型校正混杂因素的作用。Hs-CRP与CHD发病间的因果关系采用孟德尔随机化（Mendelian Randomization，MR）分析，MR分析使用加权线性回归模型进行分析，用R(3.4.3)软件包Mendelian Randomization完成。MR分析结果以比值比（Odds ratio,OR）及95%CI表示。 结果 CRP基因rs1205和rs876537位点C>T的变异与hs-CRP水平升高有关，标准回归系数分别为0.064和0.066，P值均小于0.001。CRP基因变异与CHD发病无显著关联，进一步按55岁年龄、性别、吸烟和饮酒分层分析，仍无显著关联。利用生存曲线ROC方法，选择以hs-CRP 1.08mg/L水平做切值分成升高组和正常组，结果显示hs-CRP的升高与CHD发病具有显著相关，HR（95%CI）为2.23（1.48-3.35），P<0.001；调整年龄、性别、BMI、TC、TG、HDL-C、LDL-C、吸烟、饮酒、糖尿病和高血压因素后，结果仍有统计学意义，HR（95%CI）为1.69（1.11-2.60），P=0.016。基于以上结果，选择CRP基因rs1205和rs876537作为IV，MR分析结果显示，在未调整协变量时，hs-CRP与CHD发病无显著关联，OR值（95%CI）为1.04(0.67-1.62），P=0.855；调整年龄、性别、TC、TG、HDL-C、LDL-C、GLU、BMI、吸烟、饮酒、糖尿病和糖尿病协变量后，结果仍无统计学意义，调整的OR值（95%CI）为1.07（0.69-2.18），P=0.777。 结论 CRP基因rs1205和rs876537与hs-CRP水平变化相关,hs-CRP水平升高与CHD发病无因果关系。该结果提示关注其它炎症反应指标水平变化可能对临床CHD的预防及治疗更有意义。

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第一部分

C反应蛋白基因变异与低-高密度脂蛋白胆固醇的关联研究

摘 要

背景与目的

对象与方法

结果

结论

ABSTRACT

前言

研究背景

1.1 研究对象与方法

1.1.1 研究对象

1.1.2 实验方法

1.1.3 HDL-C分组标准

1.1.4 统计学方法

1.2 结果

1.2.1 研究人群基本特征

1.2.2 不同CRP基因型hs-CRP水平的比较

1.2.3 CRP基因多态性与HDL-C水平降低关联性分析

1.2.4 Hs-CRP升高与HDL-C降低的关联分析

1.2.5 分层分析

1.2.6 不同CRP基因型HDL-C水平比较

1.3讨 论

1.4结 论

参考文献

第二部分

C反应蛋白与冠心病因果关系的孟德尔随机化分析

摘要

ABSTRACT

前 言

研究背景

2.1研究对象与方法

2.1.1 研究对象

2.1.2 实验方法

2.1.3 Hs-CRP分组

2.1.4 统计学方法

2.2结 果

2.2.1 基线研究对象的一般特征

2.2.2 CRP基因变异与hs-CRP的关联分析

2.2.3 CRP基因变异与CHD的关联分析

2.2.4 hs-CRP与CHD的关联分析

2.2.5 hs-CRP与CHD孟德尔随机化分析

2.3讨 论

2.4结 论

参考文献

综述

攻读硕士期间发表论文