多靶点酪氨酸激酶抑制剂对慢性哮喘小鼠气道重塑干预作用的研究

摘要

【目的】支气管哮喘是多种细胞和细胞组分参与的气道慢性炎症疾病。气道重塑以气道杯状细胞、平滑肌细胞增生，基底膜增厚、上皮下纤维化和粘膜下血管增生为特征，将导致不可逆的气流受限和肺功能受损。本实验选择小鼠慢性哮喘模型，研究选择性多靶点酪氨酸激酶抑制剂sunitinib在小鼠慢性哮喘模型中的作用及其改善气道重塑的分子机制，比较其与吸入性糖皮质激素干预模型效果的差异，探讨多靶点酪氨酸激酶抑制剂在哮喘治疗中的应用前景。 【方法】雌性BALB/c小鼠60只，8-10周龄，按随机数字表法分为正常对照组(A组)、哮喘气道重塑组(B组)、sunitinib干预组(C组)、布地奈德干预组(D组)、sunitinib＼布地奈德联合干预组(E组)，每组12只。用10％OVA致敏和1％OVA激发建立慢性哮喘模型。用动物肺功能仪检测各组小鼠肺功能状况；用HE染色、Masson三联染色和AB-PAS染色观察气道炎症、细胞浸润、胶原沉积和粘液杯状细胞增生情况，以免疫组织化学法观察肺组织中α-SMA的表达与定位，用图像分析软件ImageProPlus5.0半定量分析气道重塑情况；以Elisa法观察小鼠血清中IgE和支气管肺泡灌洗液中IL13的表达情况；以IP/Wb法观察小鼠肺组织中c-kit受体磷酸化程度。 【结果】对小鼠呼气阻力Re检测发现，当乙酰胆碱浓度为45μg/kg时，C、D、E组Re分别为(22.57±2.42)cmH2O-ml-1-s-1、(24.45±1.54)cmH2O-ml-1-s-1、(19.94±0.97)cmH2O-ml-1-s-1，与B组(33.77±1.85)cmH2O-ml-1-s-1比较差异有统计学意义(P<0.05)；支气管壁面积/支气管基底膜周径值C、D、E组分别为(16.68±0.41)、(24.56±1.20)、(15.08±0.16)，与B组(51.98±2.54)相比差异有统计学意义(P<0.05)；胶原面积/支气管基底膜周径值在C、D、E组分别为(7.42±0.17)、(12.62±1.18)、(5.73±0.44)，与B组(45.14±1.26)比较，差异有统计学意义(P<0.05)；粘液细胞面积/支气管基底膜周径值在C、D、E组分别为(0.54±0.50)、(0.93±0.06)、(0.30±0.11)，与B组(5.12±0.46)相比，差异有统计学意义(P<0.05)；α-SMA阳性信号面积/支气管基底膜周径值在C、D、E组分别为(9.06±0.36)、(5.26±0.50)、(4.28±0.14)，与B组(18.30±0.89)相比差异有统计学意义(P<0.05)；Elisa法测定发现，血清IgE在C、D、E组分别为(0.86±0.08)ng/ml、(0.94±0.14)ng/ml、(0.63±0.16)ng/ml，与B组(2.21±0.30)ng/ml相比差异有统计学意义(P<0.05)，肺泡灌洗液IL13在C、D、E组分别为(96.39±1.70)pg/ml、(97.66±5.49)pg/ml、(92.26±4.76)pg/ml，与B组(129.14±5.97)pg/ml比较差异有统计学意义(P<0.05)；IP/Westem-blot测定发现，c-kit磷酸化的程度在C、D、E组分别为(0.063±0.009)、(0.108±0.012)、(0.048±0.009)，与B组(0.434±0.040)相比差异有统计学意义(P<0.05)。 【结论】多靶点酪氨酸激酶抑制剂sunitinib能够减轻幔性哮喘小鼠气道重塑的程度，其机制可能是通过阻断c-kit受体的磷酸化。吸入性糖皮质激素布地奈德抑制气道重塑效果与sunitinib相近，联合干预获得较满意效果。 【

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