颞叶癫痫大鼠模型基因海马表达谱和蛋白质表达谱的研究

摘要

该研究旨在运用cDNA微阵列、二维电泳和MALDI-TOF-MS技术,构建氯化锂—匹罗卡品致痫大鼠模型海马组织的基因表达谱和蛋白质双向电泳图谱,并对发现的差异表达基因和差异表达蛋白质进行分析和鉴定,以期为进一步探讨颞叶癫痫的发病机制,寻找新的治疗靶点和研发新的治疗手段打下基础.通过cDNA微阵列的研究,我们发现了氯化锂—匹罗卡品致痫大鼠海马组织中192个基因差异表达,159条可在GenBank中登陆,其中表达上调的基因84条,表达下调的基因75条.对该研究筛选出的159个差异表达基因进行了初步的归类,发现以胞内信号转导因子、离子通道基因、细胞间通讯因子以及细胞周期和凋亡相关基因为主.这些差异表达基因可能在颞叶癫痫的发生中扮演了重要角色.通过2DE实验,我们摸索出了较为成熟的大鼠海马组织双向电泳实验条件,并首次建立了正常SD大鼠和氯化锂—匹罗卡品致痫大鼠海马组织双向电泳图谱,筛选到78个差异表达蛋白质斑点,其中31个在癫痫组表达下调,47个在癫痫组表达上调.部分差异表达蛋白质斑点用MALDI-TOF-MS进行了初步鉴定,通过数据可检索,有5个蛋白质被最终鉴定确认,分别为神经丝蛋白(Neurofilaments,NF)、突触结合蛋白(synaptotagmin)Ⅰ、热休克蛋白27(heat shock protein27,HSP27)、Voltage-dependent anion channel protein 1(VDAC1)和异柠檬酸脱氢酶(Isocitric dehydrogenase,ICD).部分蛋白质与癫痫的关系属首次报道.

目录

文摘

英文文摘

原创性声明及关于学位论文使用授权说明

一、前言

二、材料与方法

1.材料

1.1基因芯片

1.2主要试剂

1.3主要仪器

1.4 Sprague-Dawley大鼠

2.实验方法

2.1模型制作

2.2脑电图记录

2.3总RNA提取

2.4探针标记与杂交

2.5芯片实验结果分析

2.6蛋白质样品制备

2.7第一向固相pH梯度等电聚焦

2.8胶条平衡

2.9第二向垂直平板电泳

2.10凝胶染色

2.11双向电泳图像分析

2.12胶内蛋白质酶切

2.13肽质量指纹谱制备

2.14PMF数据库检索

三、结果

1.LiCl-PILO动物模型

2.基因芯片

2.1芯片质量标准控制

2.2总RNA抽提

2.3杂交结果

3.蛋白质组

3.1大鼠海马组织双向电泳条件

3.2 2-DE图谱重复性和特征

3.3蛋白质差异表达分析

3.4蛋白质鉴定

四、讨论

1.差异表达基因

1.1Alpha-endosulphine(Ensa)

1.2生长抑制特异蛋白

1.3钙调蛋白

1.4髓脂蛋白

1.5肝磷脂结合生长关联蛋白

1.6神经生长相关蛋白43

1.7 RTK、PKC和PTP

1.8丝裂原活化蛋白激酶

1.9热休克蛋白27

2.差异表达蛋白质

2.1神经丝蛋白

2.2突触结合蛋白

2.3热休克蛋白

2.4电压依赖性阴离子通道1

2.5异柠檬酸脱氢酶

3.差异基因与差异蛋白质相关性分析

五、结论

六、参考文献

七、综述

1.蛋白质组的概念

2.蛋白质组研究技术体系

2.1蛋白质分离技术

2.2蛋白质鉴定技术

2.3蛋白质组学中的生物信息学

3.神经科学中的蛋白质组学研究

3.1正常神经系统的蛋白质组研究

3.2神经系统疾病的蛋白质组研究

4.展望

参考文献

八、个人简历

九、致谢