烟雾暴露慢性阻塞性肺疾病大鼠肺内细胞凋亡和增殖的变化

摘要

目的：观察烟雾暴露慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠肺内细胞凋亡和增殖的变化。 方法：24只雄性SD大鼠随机均分为烟雾暴露组(S组)和正常对照组(N组)。S组烟雾暴露80 d；N组在常氧下饲养80 d。造模结束后，将S组随机分为S<,1>、S<,2>亚组，N组随机分为N<,1>、N<,2>亚组。用小动物肺功能测定仪测定S<,1>、N<,1>亚组的肺功能；采用右心导管法检测S<,2>、N<,2>亚组平均肺动脉压(mPAP)。行支气管肺泡灌洗，测支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞总数和分类细胞百分比及绝对值，用苏木素-伊红(HE)染色评估大鼠肺部病理改变，用平均内衬间隔(MLI)与平均肺泡数(MAN)评估肺气肿程度。利用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)技术和增殖细胞核抗原(PCNA)免疫组化法对大鼠肺内凋亡和增殖细胞阳性率(AI、PI)进行检测。计算各大鼠右心室肥厚指数(RVHI)。用SPSS13.0进行t检验、近似t检验及Pearson相关分析。 结果： 1.实验第0 d及第30 d时S组大鼠的体重分别为[(208.42±10.27)g、(253.45±28.24)g]，N组分别为[(204.67±16.83)g、(257.00±23.64)g]，两组比较差异均无统计学意义(P均>0.05)；第80 d时S组的体重[(299.51±30.11)g]低于N组[(380.63±42.24)g]，两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。 2.S组支气管粘膜和肺实质均有大量炎症细胞浸润，出现明显肺气肿改变。S组大鼠BALF中白细胞总数、中性粒细胞与巨噬细胞的百分比及绝对值，与N组比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。S组的MLI、MAN分别为[(77.32±28.73)μm个、(232.00±97.19)10<'6>个/m<'2>]，N组分别为[(43.96±7.16)μm/个、(392.84±24.41)10<'6>个/m<'2>]，两组比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。 3.S<,1>亚组的FEV<,0.3>、FEV<,0.3>/FVC％、PEF分别为[(1.86±0.22)ml、(65.06±8.40)％、(18.84±1.56)ml/s]，明显低于N<,1>亚组[(4.20±0.25)ml、(85.56±5.85)％、(47.24±7.28)ml/s]，差异均有统计学意义(P均<0.05)。 4.S组大鼠支气管上皮细胞、肺泡上皮细胞、肺动脉内皮细胞(PAEC)和肺动脉平滑肌细胞(PASMC)的AI分别为[(14.00±1.01)％、(9.99±1.00)％、(4.10±0.42)％、(4.16±0.48)％]，明显高于N组[(2.28±0.50)％、(2.07±0.43)％、(0.19±0.05)％、(0.20±0.05)％]，差异均有统计学意义(P均<0.05)。 5.S组大鼠支气管上皮细胞、肺泡上皮细胞、PAEC和PASMC的P1分别为[(12.08±0.59)％、(8.02±0.21)％、(3.72±0.25)％、(5.71±0.44)％]，明显高于N组[(1.41±0.11)％、(1.46±0.09)％、0.00％、0.00％]，差异均有统计学意义(P均<0.05)。 6.S组大鼠支气管上皮细胞、PAEC和PASMC的PI/AI分别为[(86.64±8.21)％、(91.64±10.77)％、(138.91±18.38)％]，与N组[(64.92±20.20)％、0.00％、0.00％]比较差异均有统计学意义(P均<0.05)；S组大鼠肺泡上皮细胞的PI/AI为[(81.09±9.50)％]，与N组[(73.42±15.10)％]比较差异无统计学意义(P>0.05)。 7.两组大鼠肺组织MLI与肺泡上皮细胞AI呈正相关(r=0.66，P<0.05)；MAN与肺泡上皮细胞AI呈负相关(r=0.77，P<0.05)。 8.S<,2>亚组的mPAPI(19.87±1.05)mrn Hg，l mm Hg=0.133 kPa]高于N<,2>亚组[(14.49±0.89)mm Hg]，两亚组比较差异有统计学意义(P<0.05)。S组的RVHI为[(26.37±1.53)％]，与N组[(25.69±2.23)％]比较差异无统计学意义(P>0.05)。 结论： 1.单纯烟雾暴露法可以建立COPD动物模型。 2.COPD大鼠肺内存在异常的细胞凋亡和增殖现象。 3.推测肺内细胞凋亡和增殖的异常可能在COPD发病中起到一定的作用。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：英文缩略语表

声明

第一章前言

第二章材料与方法

2.1材料

2.1.1实验动物

2.1.2主要药品与试剂

2.1.3主要仪器

2.2方法

2.2.1动物分组、处理及指标检测

2.2.2统计学处理

第三章结果

3.1一般情况

3.2支气管肺泡灌洗液(BALF)细胞学变化

3.3大鼠肺组织病理学变化

3.4肺功能测定结果

3.5两组大鼠肺内细胞凋亡的变化

3.6两组大鼠肺内细胞增殖的变化

3.7两组大鼠肺内细胞PI/AI的比较

3.8大鼠肺组织MLI及MAN与相应大鼠肺泡上皮细胞AI之间的相关关系

3.9 mPAP变化和RVHI变化

第四章讨论

第五章结论

第六章参考文献

综述肺气肿动物模型研究进展

致谢

攻读学位期间主要的研究成果目录