人脐血有核细胞和人胎盘来源间充质干细胞分离方法的比较研究

摘要

第一部分：对三种脐血分离的方法进行较为系统的比较研究，以求找到一种性价比最高的脐带血CD34+干/祖细胞分离方法。无菌条件下取正常足月剖腹产婴儿脐带血，经肝素抗凝，用三种不同方法：6％羟乙基淀粉法、NH4Cl溶解法(红细胞裂解液法)、1.077g/ml淋巴细胞液(Ficoll)密度梯度离心法，分离脐带血有核细胞，用流式细胞仪检测其表面抗原，以半固体甲基纤维素培养基进行集落培养。三种方法都能从脐血中分离出有核细胞，回收率依次为：78.4±2.71％，80.97±4.55％和21.53±3.61％，其中6％羟乙基淀粉法和NH4Cl溶解法(红细胞裂解液法)的有核细胞回收率较为相近，而淋巴细胞液(Ficoll)密度梯度离心法分离出的细胞数量远远不能满足临床需要；经流式细胞仪检测CD34+细胞结果显示，淋巴细胞液(Ficoll)密度梯度离心法分离出的有核细胞中CD34+细胞总量上低于其他两种方法；经造血干细胞集落培养发现，三种方法分离出的有核细胞都能生长成为成熟的造血细胞集落。三种方法得到了不同的细胞回收率。NH4CI溶解法得到的细胞回收率最高，且操作简单成本低廉，满足脐血移植造血干细胞的需要。从成本角度考虑，以红细胞裂解液法成本最为低廉且操作最为简便，淋巴细胞液(Ficoll)密度梯度离心法成本最为昂贵且操作复杂要求最高。 第二部分：主要比较两种不同分离方法分离和培养人胎盘来源MSC并研究它们的生物学特征。人胎盘来源MSC用密度梯度分离方法或直接消化法分离并用MSC专用培养基培养。比较两种方法得到的MSCs的增殖和生长特性，免疫特征和分化特性。结果显示两种方法分离得到的MSC都是典型的成纤维细胞形态。流式细胞仪检测表明它们均表达CD29，CD44，CD73，CD90，CD105，不表达CD14，CD34，CD45。并且它们都能诱导成为成骨、成脂细胞。

目录

文摘

英文文摘

声明

前言

实验仪器和材料

第一章人脐血有核细胞分离方法的比较研究

1.1材料和方法：

1.2实验结果

1.3讨论

第二章人胎盘间充质干细胞的分离方法的比较研究

2.1材料与方法

2.2实验结果

2.3讨论

参考文献

综述:干细胞的归巢

致谢

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