酰基化Ghrelin对TNF-α诱导的脂肪细胞脂联素及MCP-1分泌紊乱的影响

摘要

目的:
　　肥胖症的最大危害不在于脂肪组织本身，而在于脂肪组织炎症;近年的研究显示:酰基化ghrelin具有抗炎症作用。本研究旨在探讨酰基化ghrelin是否可保护3T3-L1小鼠脂肪细胞免受TNF-α所介导的炎症损伤。
　　方法:
　　实验共分四组:空白对照组、TNF-α干预组、单纯ghrelin处理组（酰基化ghrelin1.5 pmol/L、15 pmol/L、150 pmol/L、1500pmol/L）以及ghrelin预处理+TNF-α干预组。TNF-α干预组:100 ng/mL浓度的TNF-α孵育3T3-L1小鼠脂肪细胞24 h;单纯ghrelin处理组:酰基化ghrelin(1.5 pmol/L、15 pmol/L、150 pmol/L、1500 pmol/L)干预细胞28h。ghrelin预处理+TNF-α干预组:用不同浓度的酰基化ghrelin(1.5 pmol/L、15 pmol/L、150 pmol/L、1500 pmol/L)孵育3T3-L1小鼠脂肪细胞4h后，再加入TNF-α孵育3T3-L1（100 ng/mL）细胞24h;干预完成后分别用实时荧光定量PCR和Westem blotting检测3T3-L1脂肪细胞上TLR4的表达，Western blotting检测3T3-L1脂肪细胞内NF-κB p65磷酸化蛋白的表达，用ELISA方法检测细胞上清液中脂联素(Adiponectin)和单核细胞趋化蛋白-1(monocytechemotactic protein1， MCP-1)的浓度。
　　结果:
　　①与空白对照组比较，TNF-α干预组3T3-L1小鼠脂肪细胞TLR4 mRNA和蛋白的表达水平、NF-κB p65磷酸化蛋白表达水平上调，脂肪细胞分泌MCP-1增多，脂联素减少(P＜0.05)。
　　②与空白对照组比较，单纯ghrelin干预组TLR4 mRNA和蛋白水平以及NF-κB p65磷酸化蛋白水平明显下降(P＜0.05)，脂肪细胞分泌的脂联素水平也下降（15 pM浓度开始，P＜0.05），但MCP-1仅有下降趋势(P＞0.05)。
　　③与TNF-α(100 ng/mL)干预组比较，酰基化ghrelin预孵育可拮抗TNF-α所致的3T3-L1小鼠脂肪细胞TLR4/NF-κB通路的活化，TLR4 mRNA和蛋白的表达水平以及NF-κB p65磷酸化蛋白水平下调(P＜0.05)，且呈剂量依赖性;但脂肪细胞MCP-1及脂联素的分泌水平两者之间差异无显著性(P＞0.05)。
　　结论:
　　①TNF-α孵育3T3-L1脂肪细胞后，细胞上TLR4/NF-κB炎症通路活化，脂肪细胞分泌促炎因子(MCP-1)增加，而抗炎因子（脂联素）减少;
　　②酰基化ghrelin可剂量依赖性抑制TNF-α介导的3T3-L1脂肪细胞TLR4/NF-κB炎症通路的活化，但不能完全改善脂肪细胞分泌MCP-1和脂联素的紊乱。

目录

声明

摘要

英文缩写一览表

第一章 前言

第二章 材料与方法

1 实验材料

2 实验方法

3 统计学分析方法

第三章 结果

1．炎症因子TNF-α、单纯酰基化ghrelin以及酰基化ghrelin预干预后TNF-α对3T3-L1脂肪细胞TLR4／NF-κB炎症通路的影响

2．酰基化ghrelin对TNF-α孵育的3T3-L1细胞分泌脂联素以及MCP-1的影响

第四章 讨论

第五章 结论

参考文献

综述 脂肪炎症研究进展

致谢