吡格列酮对糖尿病大鼠肾组织TLR4和PPARγ表达的影响

摘要

目的：
　　1、检测糖尿病（diabetes mellitus，DM）大鼠肾组织中Toll样受体4（Toll-like receptor4 TLR4）的表达情况。
　　2、探讨吡格列酮对糖尿病大鼠肾组织TLR4表达的影响以及其抗炎分子机制；
　　方法：
　　选取57只5周龄（体重约180g-200g）的无特定病原体级雄性Sprague Dawley(SD)大鼠，采用随机分组的原则，分为正常对照组（A组，n=9只）和造模组（n=48只）。均给予常规饲料喂养，自由饮水。造模组给予腹腔注射链脲佐菌素（streptozocin, STZ,剂量为50mg/kg）诱导产生糖尿病，而正常对照组则注射等量无菌枸橼酸钠缓冲液。注射72小时后，连续三次采取大鼠尾静脉血检测随机血糖，随机血糖浓度≥16.7mmol/L者则为建模成功的糖尿病大鼠（其中有3只未成功）。将建模成功的45只大鼠随机分为5组：吡格列酮5mg/kg.d（B组，n=9只），吡格列酮10mg/kg·d组（C组，n=9只），吡格列酮5mg/kg·d+TLR4特异性抑制剂Eritoran5mg/kg.d（D组，n=9只）吡格列酮10mg/kg·d+TLR4特异性抑制剂Eritoran5mg/kg.d（E组，n=9只），未干预组（F组，n=9只），吡格列酮采用灌胃的方法给药，A组给予等量生理盐水灌胃。D、E组于第5周给予腹腔注射TLR4特异性抑制剂Eritoran5mg/kg.d，连续1周。第8周末，留取各组糖尿病大鼠24小时尿液检测尿微量白蛋白含量，并称量体重，然后按照10％水合氯醛0.3ml/100g体重的剂量通过腹腔注射来麻醉大鼠，解剖大鼠，取出左肾，称量重量，算出肾重与体重（KW/BW）的比值，接着迅速将肾脏置于液氮罐中低温保存，用Real-time PCR、Western blot法检测糖尿病大鼠模型肾组织中TLR4和PPARγ的mRNA及蛋白表达水平。取大鼠心尖部血液2ml，检测空腹血糖、血脂、血肌酐、血CRP等指标。最后取右肾，用HE和免疫组织化学两种方法进行染色， HE染色后光镜观察肾组织形态学的改变，免疫组织化学染色后检测各组大鼠肾组织中TLR4及PPARγ的表达情况。
　　结果：
　　(1)与A组相比：B、C、D、E组大鼠肾重/体重、24h尿微量蛋白、血肌酐、血 CRP含量显著增高；糖尿病大鼠肾组织 TLR4的表达明显增加， PPARγ表达明显减弱，治疗前与治疗后比较存在差异（P<0.05）；与F组相比：B、C、D、E组大鼠24h尿微量白蛋白、血 CRP含量均显著下降，肾组织 TLR4的表达水平也降低，而PPARγ表达水平却增加，比较存在显著差异（P<0.05）；C组与B组比较，糖尿病大鼠肾组织 TLR4的表达减弱，PPARγ表达稍增强，前后比较存在差异（P<0.05）；E组与D组比较，肾组织 TLR4的表达均明显减弱，PPARγ表达均明显增强，但无统计学差异（P>0.05）；
　　(2)Pearson相关性分析显示糖尿病大鼠肾组织TLR4的表达水平与24h尿微量蛋白、血肌酐、血CRP含量均呈正相关关系，相关系数分别为0.899、0.947、0.856(P<0.05)。与PPARγ表达呈负相关,相关系数为-0.919(P<0.05)。
　　结论：
　　1.糖尿病大鼠肾组织TLR4表达上调，PPARγ表达下调，提示TLR4参与糖尿病肾损害。
　　2.吡格列酮通过下调糖尿病模型大鼠肾脏组织 TLR4表达，上调 PPARγ表达，调节促炎和抗炎之间平衡，发挥抗炎作用，保护糖尿病肾病的肾组织损伤。

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